Lysistrata hat ein Treffen zwischen allen Frauen Griechenlands geplant, um den Plan zur Beendigung des Peloponnesischen Krieges zu besprechen. Als Lysistrata auf die Frauen von Sparta, Theben und anderen Gebieten wartet, um sie zu treffen, verflucht sie die Schwäche der Frauen. Lysistrata plant, die Frauen zu bitten, Sex mit ihren Ehemännern abzulehnen, bis ein Friedensvertrag unterzeichnet wurde. Lysistrata hat auch Pläne mit den älteren Frauen von Athen (dem Chor der alten Frauen) gemacht, die Akropolis später an diesem Tag zu erobern., Die Frauen aus den verschiedenen Regionen versammeln sich schließlich und Lysistrata überredet sie, einen Eid zu schwören, dass sie ihren Ehemännern Sex vorenthalten, bis beide Seiten einen Friedensvertrag unterzeichnen. Während die Frauen den Göttern zur Feier ihres Eides eine Flasche Wein opfern, hören sie die Geräusche der älteren Frauen, die die Akropolis nehmen, die Festung, in der sich die Schatzkammer Athens befindet.

In Lysistrata gibt es zwei Chöre—den Chor der alten Männer und den Chor der alten Frauen. Ein Koryphaios führt beide Chöre., Der Männerchor tritt zuerst auf der Bühne auf und trägt Holz und Feuer zu den Toren der Akropolis. Der Männerchor ist ein alter und verwurzelter Haufen von Männern, die große Schwierigkeiten mit dem Holz und den großen irdenen Feuertöpfen haben, die sie tragen. Die Männer planen, die Frauen aus der Akropolis zu rauchen. Der Chor der alten Frauen nähert sich auch der Akropolis und trägt Wasserkrüge, um die Männerfeuer zu löschen. Der Chor der alten Frauen siegt im Wettbewerb zwischen den Chören und gießt triumphierend die Wasserkrüge über die Köpfe der Männer., Der Kommissar, ein ernannter Magistrat, kommt auf die Akropolis und sucht nach Geldern für die Marineschiffe. Der Kommissar ist überrascht, die Frauen auf der Akropolis zu finden und befiehlt seinen Polizisten, Lysistrata und die anderen Frauen zu verhaften. In einem humorvollen Kampf, der wenig Körperkontakt beinhaltet, sind die Polizisten verängstigt. Der Kommissar nutzt die Gelegenheit, um den Männern in Athen mitzuteilen, dass sie mit den Frauen der Stadt zu großzügig waren und zu viel Freiheit gelassen haben. Während die Polizisten davonlaufen, müssen der Kommissar und Lysistrata über den Peloponnesischen Krieg streiten., Lysistrata argumentiert, dass der Krieg vor allem Frauen betrifft, und sie fügt ihre zwei Cent hinzu, wie die Stadt geführt werden sollte, und zeichnet eine aufwendige Analogie, um zu zeigen, dass Athen so strukturiert sein sollte, wie eine Frau Wolle spinnen würde. Lysistrata sagt dem Kommissar, dass Krieg ein Anliegen der Frauen ist, weil Frauen dafür viel geopfert haben-Frauen haben ihre Ehemänner und ihre Söhne der Anstrengung gegeben. Lysistrata fügt hinzu, dass es für eine Frau jetzt schwierig ist, einen Ehemann zu finden. Die Frauen kleiden den Kommissar spöttisch als Frau.,

Am nächsten Tag, oder vielleicht einige Zeit später, beginnt der Sex-Streik, der am Anfang des Textes entwickelt wurde, auf die Männer zu wirken. Lysistrata entdeckt Kinesias, den Ehemann von Myrrhine, der sich der Akropolis nähert. Kinesias hat eine volle Erektion und ist verzweifelt nach seiner Frau. Myrrhine weigert sich, mit Kinesias Geschlechtsverkehr zu haben, bis Frieden zwischen Athen und Sparta besteht. Kinesias sagt Myrrhine, dass ihr Kind sie braucht, er braucht sie und er liebt sie und Myrrhine gibt vor, auf seine frustrierten Bitten zu hören., Myrrhine deutet an, dass sie Kinesias lieben könnte, verzögert sich jedoch, indem sie wiederholt in die Akropolis geht, um Dinge zu holen, um es dem Paar bequem zu machen. Als Kinesias verspricht, nur an einen Friedensvertrag für Athen und Sparta zu denken, verschwindet Myrrhine in der Akropolis und hinterlässt ihrem Mann große Schmerzen.

Ein spartanischer Herold nähert sich der Akropolis und er erleidet wie Kinesias eine Erektion. Der Spartaner beschreibt die verzweifelte Situation seiner Landsleute und plädiert für einen Vertrag. Delegationen beider Staaten treffen sich dann auf der Akropolis, um über Frieden zu diskutieren., Zu diesem Zeitpunkt haben alle Männer volle Erektionen. Lysistrata kommt mit ihrer nackten Magd Peace aus der Akropolis. Während die Männer völlig vom Frieden abgelenkt sind, spricht Lysistrata sie über die Notwendigkeit der Versöhnung zwischen den Staaten Griechenlands. Lysistrata argumentiert, dass die beiden Seiten nicht kämpfen sollten, weil sowohl Athen als auch Sparta ein gemeinsames Erbe haben und weil sie sich zuvor gegenseitig geholfen haben und sich gegenseitig Schulden schulden. Mit dem Frieden als Karte von Griechenland entscheiden die spartanischen und athenischen Führer über Landrechte, die den Krieg beenden werden., Nachdem sich beide Seiten einig sind, gibt Lysistrata den Frauen die Männer zurück und es folgt eine große Feier. Das Stück endet mit einem Lied, das der Chor der alten Männer und der Chor der alten Frauen gemeinsam singen, während alle tanzen.