comptage cellulaire avec un hémocytomètre

l’hémocytomètre est divisé en 9 grands carrés de 1 mm x 1 mm. Les quatre carrés coner (identifiés par le carré rouge) sont en outre subdivisés en 4 x 4 grilles. La hauteur de la chambre formée avec le verre de couverture est de 0,1 mm, donc une chambre de 1 mm x 1 mm x 0,1 mm a un volume de 0,1 mm3 ou 10-4 ml.

pour compter les cellules à l’aide d’un hémocytomètre, ajouter 15 à 20 µl de suspension cellulaire entre l’hémocytomètre et le verre de couverture à l’aide d’un Pipetman P-20., L’objectif est d’avoir environ 100-200 cellules / carré. Compter le nombre de cellules dans les quatre carrés extérieurs diviser par quatre (le nombre moyen de cellules/carré). Le nombre de cellules par carré x 104 = le nombre de cellules/ml de suspension. Ce protocole fonctionne bien pour les cellules de mammifères adhérentes qui ont été trypsinisées ou pour les cellules en suspension, y compris les cellules D’insectes Sf9. Les globules rouges sont généralement trop petits et nombreux pour ce protocole et utilisent le carré du milieu à la place.

lorsque vous avez terminé, vaporisez l’hémocytomètre et recouvrez le slip d’éthanol à 70% pour tuer les cellules., Lavez les deux avec de l’eau désionisée et essuyez avec un Kimwipe. Envelopper dans un Kimwipe propre et retourner à la boîte de rangement. Remarque, les feuillets de couverture pour l’hémocytomère sont faits d’un verre spécial plus épais/plus plat. Veuillez essayer d’éviter de le casser ou de le perdre. Si vous le faites, réorganisez les bordereaux de couverture hémocytomère, et non les bordereaux de couverture réguliers.

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