El test de antiglobulina o Coombs forma parte de las pruebas de compatibilidad que debe realizar cualquier paciente que vaya a recibir una transfusión de glóbulos rojos. Esta prueba también es esencial en el trabajo diagnóstico de pacientes con anemia cuyo origen no es fácil de determinar y cuando la etiología debe ser identificada con precisión.

en 1945, Robin Coombs, Arthur Mourant y Rob Race describieron una prueba para detectar anticuerpos anti-Rho (anti-D) no aglutinantes.,1 originalmente, la prueba fue ideada por Robin Coombs como parte de sus estudios de postgrado en el laboratorio de Race and Mourant en Cambridge, Inglaterra en 1945. Su objetivo era estudiar las características de los anticuerpos involucrados en el contexto de lo que se conocía como eritroblastosis fetal, que ahora se conoce como enfermedad hemolítica del recién nacido (HDN), causada con mayor frecuencia por la incompatibilidad entre una madre Rh negativa sensibilizada durante un embarazo anterior, que produce anticuerpos IgG anti-D capaces de pasar la barrera de la placenta debido a su pequeño tamaño que luego cubren los glóbulos rojos fetales., Estos son posteriormente fagocitosen el bazo y el hígado, órganos que, además de sus otras funciones, mantienen la hematopoyesis extramedular en el feto para compensar la anemia resultante de la hemólisis. Posteriormente, se utilizó la prueba de Coombs para demostrar la presencia de anticuerpos incompletos que cubrían los eritrocitos in vivo, como se observa en los casos de anemia hemolítica autoinmune (AHA). La descripción del método, y su aplicación en diversas enfermedades hematológicas, se publicó en The Lancet y el British Journal of Experimental Pathology en 1945 y 1946, respectivamente.,2

los principios de la prueba de antiglobulina son los siguientes: cuando se inyectan inmunoglobulinas de la clase IgG (gamma globulina) y el complemento (beta globulina) de origen humano en diferentes conejos, producen anticuerpos IgG contra estas globulinas, que luego se mezclan en el laboratorio para producir el reactivo Coombs de amplio espectro, que se utiliza en la práctica diaria de bancos de sangre., Las moléculas de antiglobulina IgG del conejo actúan como un puente, que une los anticuerpos IgG incompletos que cubren los glóbulos rojos adyacentes, causando aglutinación y visualización de la reacción a simple vista, que se puede ver en un tubo de ensayo o una tarjeta de gel, interpretada como una prueba de Coombs positiva.

Hay dos variantes de esta prueba. Cuando se emplea para detectar anticuerpos Unidos a eritrocitos in vivo se conoce como prueba directa de antiglobulina o prueba directa de Coombs., Por otro lado, cuando la antiglobulina se utiliza para detectar la presencia in vitro de anticuerpos libres en suero después de la incubación en la fase de Coombs de la coincidencia cruzada, se conoce como prueba indirecta de antiglobulina o prueba indirecta de Coombs. Esta variante del test es la que se utiliza en la detección de anticuerpos anti-D en el suero materno de mujeres con antígeno D negativo, así como en la búsqueda e identificación de anticuerpos en suero cuando se emplea un panel de eritrocitos comerciales, cuyo fenotipo se conoce.,3,4

Aplicacionesla prueba directa de Coombs

• en la investigación de anticuerpos, como los de pacientes con anemia hemolítica autoinmune.

• en la investigación de aloanticuerpos, como en recién nacidos que sufren enfermedad hemolítica del recién nacido.

• para documentar una reacción de transfusión hemolítica.

La prueba indirecta de Coombs

• en la detección de anticuerpos irregulares en el suero del paciente.

• en la determinación de fenotipos de glóbulos rojos.

• Como parte de la prueba cruzada.,

métodos manuales y automáticos para la prueba de Coombs

se pueden considerar, En general: (1) técnicas de tubo de ensayo, que eran tradicionales y ahora están prácticamente sin usar, (2) técnicas de microplacas y (3) técnicas de aglutinación en columnas de gel. Los métodos de fase sólida (gel, perlas de vidrio y microplacas) aparecieron en los años 90 y han visto un uso generalizado en México desde el año 2000. Actualmente, la técnica más utilizada es la de tarjetas con columnas de gel.

La prueba de Gel

en 1990, Lapierre desarrolló un sistema de pruebas de gel.,5 Estos se basaron en el uso de partículas de gel de acrilamida dextrano, una matriz de gel que actuaba como filtro, impidiendo el paso de los glóbulos rojos aglutinados y atrapando así a los glóbulos rojos en la superficie del gel según su tamaño, lo que constituye una prueba positiva. Una reacción negativa forma un botón de glóbulos rojos no aglutinados en la parte inferior del microtubo., La tarjeta de gel contiene 6 microtubos, lo que permite la determinación de 6 antígenos y anticuerpos diferentes, generalmente tipo de sangre ABO (directa e inversa) y RH (antígeno D), pruebas de compatibilidad y pruebas de Coombs. Estas pruebas se pueden realizar de forma manual o automática.,5

entre las ventajas de la automatización se encuentran las siguientes: se puede analizar un mayor número de muestras, no se requieren eritrocitos lavados, se mejora la precisión y reproducibilidad, se elimina la subjetividad en la interpretación de los resultados, los resultados se pueden conservar por horas y se reduce el trabajo manual, minimizando la susceptibilidad al error en las diferentes fases de la prueba.

la prueba directa de Coombs

Cuando la prueba directa de antiglobulina es positiva, esto significa que los anticuerpos IgG incompletos o fragmentos del complemento (específicamente C3d), están presentes, en los eritrocitos., Por otro lado, cuando no hay aglutinación (prueba negativa), estos anticuerpos no están presentes en la superficie de los eritrocitos (Fig. 1).6

una prueba de Coombs directa negativa no significa necesariamente que no haya anticuerpos incompletos en los glóbulos rojos, ya que los reactivos habituales para las antiglobulinas polispecificas humanas, que se usan diariamente en los bancos de sangre, solo reaccionan cuando hay al menos 200 moléculas de IgG o más por eritrocito. De la misma manera, si el anticuerpo involucrado es una IgA, como en algunos casos de anemia hemolítica autoinmune, la prueba será negativa, ya que el reactivo estándar de Coombs no contiene anticuerpos anti-IgA.,7,8

la prueba indirecta de Coombs

la prueba indirecta de antiglobulina humana es positiva cuando hay anticuerpos IgG libres en el suero, como es el caso de la enfermedad hemolítica del recién nacido, la prueba también se usa rutinariamente para la identificación de anticuerpos irregulares (inesperados) empleando un panel comercial de glóbulos rojos (Fig. 1).,6

En conclusión, desde su introducción en el laboratorio clínico hace 70 años, el test de Coombs ha evolucionado técnicamente, y sus principios siguen siendo aplicables hoy en día, lo que hace de este sencillo y económico test uno de los más versátiles e importantes utilizados en el diagnóstico de enfermedades hematológicas, y en la práctica segura de la medicina transfusional.

financiación

no se prestó apoyo financiero.

conflicto de intereses

los autores no tienen conflictos de intereses que declarar.