esta prueba demuestra la presencia de catalasa, una enzima que cataliza la liberación de oxígeno del peróxido de hidrógeno (H2O2). Se utiliza para diferenciar aquellas bacterias que producen una enzima catalasa, como los estafilococos, de las bacterias que no producen catalasa, como los estreptococos. Normalmente se utiliza un 3% de H2O2 para el cultivo de rutina, mientras que el 15% de H2O2 se utiliza para la detección de catalasa en anaerobios.,

principio de la prueba de catalasa

la enzima catalasa media la descomposición del peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua. La presencia de la enzima en un aislado bacteriano es evidente cuando se introduce un pequeño inóculo en el peróxido de hidrógeno, y se produce la rápida elaboración de burbujas de oxígeno. La falta de catalasa es evidente por la falta o débil producción de burbujas. El cultivo no debe tener más de 24 horas de antigüedad.,

Las bacterias se protegen así del efecto letal del peróxido de hidrógeno que se acumula como producto final del metabolismo aeróbico de carbohidratos.

propósito o usos de la prueba de catalasa

• El estreptococo Enterococcusor morfológicamente similar (catalasa negativa) y el estafilococo (catalasa positiva) se pueden diferenciar utilizando la prueba de catalasa.
• También es valioso en la diferenciación de bacterias aeróbicas y anaeróbicas obligadas.
• La prueba de catalasa semicuantitativa se utiliza para la identificación de Mycobacterium tuberculosis.,
• Se utiliza para diferenciar las cepas aerotolerantes de Clostridium, que son catalasas negativas, de las especies de bacilos, que son positivas.
• La prueba de catalasa se puede utilizar como una ayuda para la identificación de Enterobacteriaceae.

procedimiento de la prueba de catalasa

1. vierta 1-2 ml de solución de peróxido de hidrógeno en un tubo de ensayo.
2. utilizando un palo de madera estéril o una varilla de vidrio, tomar varias colonias del organismo de prueba de 18 a 24 horas y sumergir en la solución de peróxido de hidrógeno.
3. Observe el burbujeo inmediato.,

método de la diapositiva

1. utilice un lazo o un palillo estéril de madera para transferir una pequeña cantidad de crecimiento de la colonia en la superficie de una diapositiva limpia, seca del vidrio.
2. coloque una gota de 3% de H2O2 en el portaobjetos de vidrio.
3. observar la evolución de las burbujas de oxígeno.

interpretación del resultado de la prueba de catalasa y ejemplos

positivo: burbujas copiosas producidas, burbujeo activo

ejemplos: Staphylococci, Micrococci, Listeria, Corynebacterium diphtheriae, Burkholderia cepacia, Nocardia, la familia Enterobacteriaceae (Citrobacter, E., coli, Enterobacter, Klebsiella, Shigella, Yersinia, Proteus, Salmonella, Serratia), Pseudomonas, Mycobacterium tuberculosis, Aspergillus, Cryptococcus y Rhodococcus equi.

Negativo: Ninguna o muy pocas burbujas producidas.

ejemplos: Streptococcus y Enterococcus spp

control de calidad de la prueba de catalasa

positivo: Staphylococcus aureus– ATCC 33592

negativo: Enterococcus faecalis– ATCC 29212

precauciones de la prueba de catalasa

• Los organismos de la prueba no deben tomarse del cultivo de agar sanguíneo., Los glóbulos rojos contienen catalasa y su presencia dará un falso positivo en la prueba.
• La cultura debe tener de 18 a 24 horas de edad.
• El peróxido de hidrógeno debe ser fresco ya que es muy inestable.
• El lazo del alambre del hierro no se debe utilizar.
• algunas bacterias producen una peroxidasa que cataliza una descomposición del peróxido de hidrógeno causando que la reacción sea débilmente positiva; (algunas burbujas se elaboran lentamente). Esto no debe confundirse con una reacción positiva.
• No agregue organismo al reactivo, particularmente si se utilizan bucles de inoculación que contienen hierro., Los bucles que contienen hierro causarán resultados falsos positivos si se exponen al peróxido de hidrógeno.