detta test visar närvaron av katalas, ett enzym som katalyserar frisättningen av syre från väteperoxid (H2O2). Det används för att skilja de bakterier som producerar ett enzym katalas, såsom stafylokocker, från icke-katalas producerande bakterier såsom streptokocker. Normalt används 3% H2O2 för rutinkulturen medan 15% H2O2 används för detektering av katalas i anaerober.,
principen om katalas Test
enzymet katalas förmedlar nedbrytningen av väteperoxid i syre och vatten. Närvaron av enzymet i ett bakterielisolat är uppenbart när ett litet inokulat införs i väteperoxid, och den snabba utarbetandet av syrebubblor uppträder. Bristen på katalas framgår av brist på eller svag bubbelproduktion. Kulturen ska inte vara mer än 24 timmar gammal.,
bakterier skyddar sig därmed från den dödliga effekten av väteperoxid som ackumuleras som slutprodukt av aerob kolhydratmetabolism.
syfte eller användning av Katalastest
- den morfologiskt likartade Enterococcusor Streptococcus (Catalas negative) och Staphylococcus (Catalas positive) kan differentieras med hjälp av katalastestet.
- också värdefullt vid differentiering av aeroba och förplikta anaeroba bakterier.
- Semiquantitative catalase test används för identifiering av Mycobacterium tuberculosis.,
- Det används för att differentiera aerotoleranta stammar av Clostridium, som är katalas negativa, från Bacillus arter, som är positiva.
- Katalastest kan användas som ett hjälpmedel för identifiering av Enterobacteriaceae.
förfarande för Katalastest
- Häll 1-2 ml väteperoxidlösning i ett provrör.
- använd en steril träpinne eller en glasstav, ta flera kolonier av testorganismen 18 till 24 timmar och fördjupa sig i väteperoxidlösningen.
- Observera för omedelbar bubbling.,
Glidmetod
- använd en slinga eller steril träpinne för att överföra en liten mängd kolonitillväxt i ytan av en ren, torr Glasskiva.
- placera en droppe på 3% H2O2 i glasrutan.
- observera utvecklingen av syrebubblor.
resultat tolkning av Katalastest och exempel
positiv: kopiösa bubblor produceras, aktiv bubbling
exempel: stafylokocker, Mikrokocker, Listeria, Corynebacterium diphtheriae, Burkholderia cepacia, Nocardia, familjen Enterobacteriaceae (Citrobacter, E., coli Enterobacter, Klebsiella, Shigella, Yersinia, Proteus, Salmonella, Serratia), Pseudomonas, Mycobacterium tuberculosis, Aspergillus, Cryptococcus, och Rhodococcus equi.
negativ: inga eller mycket få bubblor produceras.
exempel: Streptococcus och Enterococcus spp
kvalitetskontroll av Katalastest
positiv: Staphylococcus aureus– ATCC 33592
negativ: Enterococcus faecalis– ATCC 29212
försiktighetsåtgärder för Katalastest
- testorganismerna ska inte tas från blodagarkulturen., Röda blodkroppar innehåller katalas och deras närvaro kommer att ge ett falskt positivt test.
- kulturen ska vara 18 till 24 timmar gammal.
- väteperoxid måste vara färsk eftersom den är mycket instabil.
- järntrådslinga ska inte användas.
- vissa bakterier producerar ett peroxidas som katalyserar en nedbrytning av väteperoxid som orsakar reaktionen att vara svagt positiv; (några bubblor utarbetade långsamt). Detta bör inte förväxlas med en verkligt positiv reaktion.
- lägg inte till organismen i reagens, särskilt om järninnehållande inokulerande slingor används., Järninnehållande slingor kommer att orsaka falska positiva testresultat om de utsätts för väteperoxid.