antiglobulin eller Coombs test är en del av de kompatibilitetstester som alla patienter som kommer att få en transfusion av röda blodkroppar måste genomgå. Detta test är också viktigt vid diagnostiskt arbete hos patienter med anemi vars ursprung inte är lätt bestämt och när etiologin måste identifieras exakt.

1945 beskrev Robin Coombs, Arthur Mourant och Rob Race ett test för att detektera Anti-Rho (anti-D) icke-agglutinantantikroppar.,1 ursprungligen utformades testet av Robin Coombs som en del av hans forskarutbildning vid Race and Mourant ’ s laboratory i Cambridge, England 1945. Hans mål var att studera egenskaperna hos de antikroppar som är involverade i samband med vad som var känt som fetal erytroblastos, som nu är känd som hemolytisk sjukdom hos nyfödda (HDN), orsakade oftast av inkompatibiliteten mellan en Rh-negativ mamma sensibiliserad under en tidigare graviditet, som producerar IgG anti-D-antikroppar som kan passera placentabarriären på grund av sin lilla storlek som sedan täcker de fetala röda blodkropparna., Dessa är senare fagocyterade i mjälten och levern, organ som, förutom deras andra funktioner, upprätthålla extramedullär hematopoiesis hos fostret för att kompensera för anemi till följd av hemolys. Senare användes Coombs-testet för att visa närvaron av ofullständiga antikroppar som täckte erytrocyterna in vivo, såsom ses i fall av autoimmun hemolytisk anemi (aha). Beskrivningen av metoden och dess tillämpning i olika hematologiska sjukdomar publicerades i Lancet och British Journal of Experimental Pathology 1945 respektive 1946.,2

principerna för antiglobulintestet är följande: när IGG-klassens immunoglobuliner (gammaglobulin) och komplementet (beta-globulin) av mänskligt ursprung injiceras i olika kaniner producerar de IgG-antikroppar mot dessa globuliner, vilka senare blandas i laboratoriet för att producera bredspektrum Coombs-reagenset, som används i daglig blodbankspraxis., Kaninens IGG-antiglobulinmolekyler fungerar som en bro, som förenar de ofullständiga IgG-antikropparna som täcker intilliggande röda blodkroppar, vilket orsakar agglutination och visualisering av reaktionen mot blotta ögat, vilket kan ses i ett provrör eller gelkort, tolkat som ett positivt Coombs-test.

det finns två varianter av detta test. När det används för att detektera antikroppar bundna till erytrocyter in vivo är det känt som ett direkt antiglobulintest eller direkt Coombs-test., Å andra sidan, när antiglobulin används för att detektera närvaron in vitro av fria antikroppar i serum efter inkubation i Coombs-fasen i cross match, är det känt som ett indirekt antiglobulintest eller ett indirekt Coombs-test. Denna variant av testet är den som används vid detektering av anti-D-antikroppar i moderns serum hos kvinnor som är D-antigen negativa, liksom sökandet efter och identifieringen av antikroppar i serum när en panel av kommersiella erytrocyter, vars fenotyp är känd, används.,3,4

Applikationerdet direkta Coombs-testet

• vid undersökning av antikroppar, såsom de hos patienter med autoimmun hemolytisk anemi.

• vid undersökning av alloantikroppar, såsom hos nyfödda som lider av hemolytisk sjukdom hos nyfödda.

• för att dokumentera en hemolytisk transfusionsreaktion.

det indirekta Coombs-testet

• vid detektering av oregelbundna antikroppar i patientens serum.

• vid bestämning av fenotyper av röda blodkroppar.

• som en del av crossmatch-testet.,

manuella och automatiska metoder för Coombs-testet

dessa kan i allmänhet övervägas: (1) teströrstekniker, som var traditionella och är nu praktiskt oanvända, (2) mikroplattetekniker och (3) agglutinationstekniker i gelkolumner. De fasta fasmetoderna (gel, glaspärlor och mikroplattor) uppträdde på 90-talet och har sett generaliserad användning i Mexiko sedan år 2000. För närvarande är den mest använda tekniken den för kort med gelkolumner.

Geltestet

1990 utvecklade Lapierre ett system med geltester.,5 Dessa baserades på användningen av dextran akrylamid gelpartiklar, en gelmatris som fungerade som ett filter, vilket stoppade de agglutinerade röda blodkropparna från att passera genom och därmed fånga röda blodkroppar på gelens yta i enlighet med deras storlek, vilket utgör ett positivt test. En negativ reaktion bildar en knapp av icke-agglutinerade röda blodkroppar längst ner i mikroröret., Gelkortet innehåller 6 mikrotuber, vilket möjliggör bestämning av 6 olika antigener och antikroppar, vanligtvis ABO blodgrupp (direkt och invers) och Rh (D-antigen), kompatibilitetstester och Coombs-test. Dessa tester kan utföras manuellt eller automatiskt.,5

bland fördelarna med automatisering är följande: ett större antal prover kan analyseras, tvättade erytrocyter krävs inte, precision och reproducerbarhet förbättras, subjektivitet vid tolkningen av resultaten elimineras, resultaten kan bevaras i timmar och manuell arbetskraft minskar, minimerar mottagligheten för fel i testets olika faser.

det direkta Coombs-testet

När det direkta antiglobulintestet är positivt betyder det att ofullständiga IgG-antikroppar eller fragment av komplementet (specifikt C3d) är närvarande på erytrocyterna., Å andra sidan, när det inte finns någon agglutination (ett negativt test), är dessa antikroppar inte närvarande på erytrocyternas yta (Fig. 1).6

ett negativt direkt Coombs-test betyder inte nödvändigtvis att det inte finns några ofullständiga antikroppar på de röda blodkropparna, eftersom de vanliga reagenserna för humana polyspecifika antiglobuliner, som används dagligen i blodbanker, endast reagerar när det finns minst 200 IgG-molekyler eller mer per erytrocyt. På samma sätt, om den involverade antikroppen är en IgA, som i vissa fall av autoimmun hemolytisk anemi, kommer testet att vara negativt, eftersom standard Coombs-reagenset inte innehåller anti-IgA-antikroppar.,7,8

det indirekta Coombs-testet

det indirekta humana antiglobulintestet är positivt när det finns fria IgG-antikroppar i serum, vilket är fallet med hemolytisk sjukdom hos nyfödda, används testet också rutinmässigt för identifiering av oregelbundna (oväntade) antikroppar som använder en kommersiell panel av röda blodkroppar (Fig. 1).,6

Sammanfattningsvis, sedan introduktionen till det kliniska laboratoriet för 70 år sedan, har Coombs-testet utvecklats tekniskt och dess principer fortsätter att vara tillämpliga idag, vilket gör detta enkla och ekonomiska test ett av de mest mångsidiga och viktiga som används vid diagnos av hematologiska sjukdomar och i säker praxis för Transfusionsmedicin.

finansiering

inget ekonomiskt stöd tillhandahölls.

intressekonflikt

författarna har inga intressekonflikter att förklara.