testul antiglobulină sau Coombs face parte din testele de compatibilitate pe care trebuie să le treacă orice pacient care va primi o transfuzie de globule roșii. Acest test este, de asemenea, esențial în activitatea de diagnosticare a pacienților cu anemie a căror origine nu este ușor de determinat și când etiologia trebuie identificată cu precizie.în 1945, Robin Coombs, Arthur Mourant și Rob Race au descris un test pentru detectarea anticorpilor anti-Rho (anti-D) non-aglutinanți.,1 Inițial, testul a fost conceput de Robin Coombs, ca parte a studiilor postuniversitare la Cursă și Mourant laborator din Cambridge, Anglia în 1945. Scopul său a fost de a studia caracteristicile de anticorpi implicate în contextul a ceea ce a fost cunoscut ca fetale erythroblastosis, care este acum cunoscut sub numele de boala hemolitica a nou-nascutului (HDN), cauzate cel mai frecvent de incompatibilitate între o mama Rh negativ sensibilizat în timpul unei sarcini anterioare, care produce IgG anti-D-anticorpi capabili de a trece bariera placentară datorită dimensiunii lor mici, care apoi se acopera fetale celulele rosii din sange., Acestea sunt ulterior fagocitate în splină și ficat, organe care, pe lângă celelalte funcții, mențin hematopoieza extramedulară la făt pentru a compensa anemia rezultată din hemoliză. Ulterior, testul Coombs a fost utilizat pentru a demonstra prezența anticorpilor incompleți care au acoperit eritrocitele in vivo, cum se observă în cazurile de anemie hemolitică autoimună (AHA). Descrierea metodei și aplicarea acesteia în diferite boli hematologice au fost publicate în The Lancet și British Journal of Experimental Pathology în 1945 și, respectiv, în 1946.,2

principiile de test antiglobulinic sunt după cum urmează: atunci când imunoglobuline din clasa IgG (gamma globuline) și complementul (beta globuline) de origine umană este injectat în diferite iepuri, ele produc anticorpi IgG împotriva acestor globulinele, care sunt mai târziu amestecat în laborator pentru a produce spectru larg Coombs reactiv, care este folosit în sange de zi cu zi practica bancară., Moleculele de antiglobulină IgG ale iepurelui acționează ca o punte, care unește anticorpii IgG incompleți care acoperă celulele roșii din sânge adiacente, provocând aglutinarea și vizualizarea reacției cu ochiul liber, care poate fi văzută într-o eprubetă sau un card de gel, interpretat ca un test Coombs pozitiv.

există două variante ale acestui test. Atunci când este folosit pentru a detecta anticorpi legați de eritrocite in vivo, este cunoscut ca un test antiglobulin direct sau test Coombs direct., Pe de altă parte, atunci când antiglobulina este utilizată pentru a detecta prezența in vitro a anticorpilor liberi în ser după incubare în faza Coombs a meciului încrucișat, este cunoscută sub numele de test antiglobulin indirect sau test Coombs indirect. Această variantă a testului este cea utilizată în detectarea anticorpilor anti-D în serul matern al femeilor care sunt antigen D negativ, precum și căutarea și identificarea anticorpilor în ser atunci când se utilizează un panou de eritrocite comerciale, al cărui fenotip este cunoscut.,3,4

Aplicațiitestul Coombs direct

• în investigarea anticorpilor, cum ar fi cei la pacienții cu anemie hemolitică autoimună.în investigarea aloanticorpilor, cum ar fi la nou-născuții care suferă de boală hemolitică a nou-născutului.pentru a documenta o reacție hemolitică de transfuzie.

testul Coombs indirect

• în detectarea anticorpilor neregulați în serul pacientului.

• în determinarea fenotipurilor de celule roșii din sânge.

• ca parte a testului crossmatch.,metode manuale și automate pentru testul Coombs acestea pot fi luate în considerare, în general: (1) tehnici de eprubetă, care erau tradiționale și sunt acum practic neutilizate, (2) tehnici de microplăci și (3) tehnici de aglutinare în coloane de gel. Metodele de fază solidă (gel, margele de sticlă și microplăci) au apărut în anii 90 și au văzut utilizarea generalizată în Mexic din anul 2000. În prezent, tehnica cea mai utilizată este cea a cardurilor cu coloane de gel.în 1990, Lapierre a dezvoltat un sistem de teste pe gel.,5 acestea s-au bazat pe utilizarea particulelor de gel dextran acrilamidă, o matrice de gel care a acționat ca un filtru, oprind trecerea globulelor roșii aglutinate și, astfel, captarea globulelor roșii pe suprafața gelului în funcție de mărimea lor, ceea ce constituie un test pozitiv. O reacție negativă formează un buton de globule roșii non-aglutinate în partea inferioară a microtubului., Cardul de gel conține 6 microtuburi, ceea ce permite determinarea a 6 antigene și anticorpi diferiți, de obicei Tip de sânge ABO (direct și invers) și Rh (antigen D), teste de compatibilitate și teste Coombs. Aceste teste pot fi efectuate manual sau automat.,Printre avantajele automatizării se numără următoarele: un număr mai mare de probe pot fi analizate, eritrocitele spălate nu sunt necesare, precizia și reproductibilitatea sunt îmbunătățite, subiectivitatea în interpretarea rezultatelor este eliminată, rezultatele pot fi păstrate ore întregi, iar munca manuală este redusă, minimizând susceptibilitatea la eroare în diferitele faze ale testului.

  testul Coombs direct

  când testul antiglobulin direct este pozitiv, aceasta înseamnă că anticorpii IgG incompleți sau fragmente ale complementului (în special C3d) sunt prezente pe eritrocite., Pe de altă parte, atunci când nu există aglutinare (un test negativ), acești anticorpi nu sunt prezenți pe suprafața eritrocitelor (Fig. 1).6

  

  figura 1.

  interpretarea rezultatelor testelor anti-globulină umană sau Coombs.

  (0, 14 MB).,

  Un negativ test Coombs direct nu înseamnă neapărat că nu există incomplete anticorpi la celulele rosii din sange, de obicei reactivi pentru om polyspecific antiglobulins, care sunt folosite zilnic în băncile de sânge, reacționează doar atunci când există cel puțin 200 de molecule de IgG sau mai mult pe eritrocite. În același mod, dacă anticorpul implicat este un IgA, ca în unele cazuri de anemie hemolitică autoimună, testul va fi negativ, deoarece reactivul standard Coombs nu conține anticorpi anti-IgA.,7,8

  indirecte testul Coombs

  indirecte antiglobulina umană testul este pozitiv atunci când sunt liber anticorpi IgG în ser, cum este cazul cu boala hemolitica a nou-nascutului, testul este, de asemenea, utilizat în mod curent pentru identificarea neregulate (neașteptată) anticorpi angajarea comercial panou de celule roșii din sânge (Fig. 1).,În concluzie ,de la introducerea sa în laboratorul clinic în urmă cu 70 de ani, testul Coombs a evoluat din punct de vedere tehnic, iar principiile sale continuă să fie aplicabile astăzi, ceea ce face ca acest test simplu și economic să fie unul dintre cele mai versatile și importante utilizate în diagnosticul bolilor hematologice și în practica sigură a medicinii transfuzionale.nu s-a acordat sprijin financiar.

  Conflict de interese

  autorii nu au conflicte de interese de declarat.