Coagulazo de testare este cea mai sigura metoda pentru identificarea Staphylococcus aureus. Producția de coagulază poate fi detectată utilizând fie testul de coagulază lamelă (SCT), fie testul de coagulază tubulară (TCT)., Coagulaza de diapozitive detectează coagulaza legată (numită și” factor de aglomerare”), care reacționează direct cu fibrinogenul din plasmă, provocând aglutinarea rapidă a celulelor. Izolatele Negative după SCT necesită confirmarea cu TCT superioară, deoarece tulpinile cu deficit de factor de aglomerare produc de obicei coagulază liberă. Tub coagulazo detectează secretat extracelular gratuit testul coagulazei care reacționează cu o substanță din plasmă numit „Coagulazo-Reacționează Factor” (CRF) pentru a forma un complex, care, la rândul său, reacționează cu fibrinogen la forma de fibrină (cheag) ., Tulpinile de stafilococi coagulazo-pozitivi-animale au fost izolate din specimene clinice umane, dar unele izolate stafilococice animale fermentează, de asemenea, manitol . Acest studiu a evaluat performanța TCTs, DNase și MSA, metodele fenotipice utilizate frecvent în identificarea Staphylococcus aureus.

detectarea Staphylococcus aureus cu testele fenotipice disponibile

PCR-amplificarea genei nuc, care a fost utilizată ca test de bază, a detectat 32 Staphylococcus aureus din cele 60 de izolate stafilococice, vezi Tabelul 2., Din cele 32 de nuc-pozitiv Staphylococcus aureus izolate, MSA detectat cel mai mare număr de izolate (30 de 32 de ani, 94%), în timp ce TCT (umane și oi cu plasmă respectiv) detectat 29 și 27 din 32 izolate (91% și respectiv 84%), tabelul 2. DNase a detectat cel mai mic număr de izolate (24 de 32, 75%).

Nouă dintre cele 32 de nuc-pozitiv Staphylococcus aureus izolate (28%) au fost coagulazo negativ, ceea ce înseamnă că unele izolate poate fi identificat în mod eronat de către TCT ca un singur test. Staphylococcus aureus coagulază negativ poate fi, probabil, tulpini de MRSA care sunt raportate să reacționeze slab sau negativ cu TCT , sau tulpini rare de Staphylococcus aureus care sunt raportate a fi coagulază negativă . Două izolate de Staphylococcus aureus (6%) au fost, de asemenea, negative MSA., Shittu și colab au raportat, de asemenea, Staphylococcus aureus negativ la manitol, care a fost rezistent la meticilină . În plus, opt dintre cele 32 de izolate de Staphylococcus aureus pozitive la nuc au fost DNase negative (25%). Rao et al au raportat Staphylococcus aureus negativ DNase, dar fără explicații pentru aceste constatări . Șase stafilococi, alții decât izolatele de Staphylococcus aureus confirmate de nuc, au produs colonii galbene pe MSA, iar constatări similare au fost raportate de alți investigatori . O altă constatare rară în acest studiu a fost un izolat care a fost DNase pozitiv, dar MSA-negativ și tub coagulază-negativ (adică., non-Staphylococcus aureus). Presupunem că acest izolat ar fi putut fi Staphylococcus schleiferi subsp. coagulani, care conform metodei standard naționale este, de asemenea, DNase pozitiv .testele fenotipice unice sunt ineficiente pentru identificarea Staphylococcus aureus am folosit sensibilitatea și specificitatea pentru a evalua performanța testelor individuale în detectarea Staphylococcus aureus., Creșterea pe MSA a fost cea mai sensibilă (sensibilitate 94%), urmată de TCT (plasmă umană și ovină, sensibilitate 91% și respectiv 81%), în timp ce testul DNase a fost cel mai puțin sensibil (sensibilitate 75%). În schimb, testul DNase a fost cel mai specific (specificitate 96%) urmat de MSA (specificitate 79%), în timp ce TCT (plasma umană și plasma ovină) a fost cel mai puțin specific (11% și, respectiv, 7%), tabelul 3. Per ansamblu, dintre testele individuale studiate, creșterea pe AMS a fost cea mai bună la identificarea Staphylococcus aureus (94% sensibilitate și 79% specificitate)., Rezultatele noastre diferă ușor de cele ale Han et al, care au raportat sensibilitate și specificitate de 76,5% și, respectiv, 99,6% pentru MSA . D ‘ Souza și colab, au raportat, de asemenea, sensibilitate de 71%, puțin mai mică decât a noastră . Sensibilitatea ridicată a MSA în detectarea Staphylococcus aureus s-ar putea datora capacității sale de a izola Staphylococcus aureus patogen, diferențiind stafilococii coagulazo-negativi de stafilococii coagulazo-pozitivi.,

Pentru tub coagulazo, plasmă umană a fost mai sensibil decât oile cu plasmă (91% vs 81% sensibilitate), ceea ce înseamnă că utilizarea de oaie cu plasmă TCTs poate detecta mai fals negative izolate. Astfel, în acest cadru, este puțin probabil ca plasma de oaie să înlocuiască plasma umană pentru TCT-urile de rutină., Datele noastre sunt în acord cu constatările anterioare în care sensibilitatea de 94-100% a fost raportată de alți investigatori . Cu toate acestea, în acest studiu, sensibilitatea plasmei umane și ovine a fost mai mare decât cea raportată în alte medii, unde au fost raportate valori de până la 54,5% (plasmă umană) și 45,5% (plasmă ovină). Prin urmare, cu testele de coagulază, performanța plasmei variază în funcție de setare, iar alegerea plasmei poate influența eficiența testului. De asemenea, utilizarea EDTA sau citrat ca anticoagulant influențează performanța testului., De remarcat, citratul afectează numai reacțiile de coagulază ale enterococilor acolo unde este utilizat , dar nu afectează organismele producătoare de coagulază, cum ar fi Staphylococcus aureus.testul DNase a avut o sensibilitate de 75% și o specificitate de 96%, care sunt comparabile cu alte studii în care au fost raportate o sensibilitate de 75% și o specificitate de 100%. În acest studiu, testul DNase a fost cel mai specific dintre toate testele și a avut cel mai mic număr de izolate fals pozitive (a existat doar unul fals pozitiv)., Acest lucru a fost în acord cu alte rapoarte, în care testul DNase a fost raportat ca fiind superior TCT . Creșterea pe MSA a fost, de asemenea, foarte specifică (specificitate 79%), în timp ce testul cel mai puțin specific a fost coagulaza tubului (plasmă umană și ovină, specificitate 11% și, respectiv, 7%).în schimb, alte studii au raportat o specificitate ridicată (93, 6%) pentru plasma umană și ovină cu TCT ., De specificitate scăzută în studiul nostru poate fi parțial datorită non specifice detectarea altor stafilococi coagulazo-pozitivi, cum ar fi Staphylococcus subspecia schleiferi coagulans, Staphylococcus delphini, Staphylococcus intermedius și Staphylococcus hyicu s. Staphylococcus delphini și Staphylococcus intermedius sunt rar izolate clinice în timp ce Staphylococcus hyicu s este nedeterminată (cu prevalența variază de la 11% la 89% ). Prevalența acestor izolate poate fi ridicată în anumite situații., Deși MSA și DNase au avut specificități și sensibilități ridicate, ca teste individuale , utilizarea lor în identificarea de rutină a Staphylococcus aureus este redusă de capacitatea lor de a detecta alte izolate bacteriene și sunt utilizate mai ales în timpul ecranelor inițiale . Într-adevăr, în Nigeria și Japonia au fost raportate conurile pozitive de sare de manitol (Staphylococcus caprae, S. hemolyticus și S. saprophyticus)., Astfel, în anumite situații, dacă sunt utilizate individual pentru a identifica Staphylococcus aureus, testele fenotipice comune pot fi insuficiente; unele izolate vor fi identificate greșit, fie ca Staphylococcus aureus, fie contra.

o combinație de MSA și DNase îmbunătățește testul coagulazei tubului

am evaluat apoi sensibilitatea și specificitatea combinațiilor de testare (adică MSA/DNase/TCT) la detectarea Staphylococcus aureus, cu scopul de a îmbunătăți performanța TCT., Am obținut specificitate absolută (100%) în detectarea Staphylococcus aureus cu combinații de testare, cu excepția combinației DNase/MSA (specificitate 92%). În schimb, sensibilitatea combinațiilor de testare a variat, MSA / DNase/TCT (plasmă umană) fiind cea mai sensibilă (sensibilitate 75%), în timp ce MSA/DNase / TCT (plasmă ovină) a fost cea mai puțin sensibilă (sensibilitate 25%), tabelul 3.

o combinație de MSA / DNase a dus la specificitate și sensibilitate de 92% și, respectiv, 96%, iar aceasta ar fi combinația de alegere pentru identificarea Staphylococcus aureus., Cu toate acestea, deoarece ambele teste nu sunt specifice Staphylococcus aureus și pot detecta alte izolate bacteriene, combinația duală poate fi utilizată numai pentru îmbunătățirea TCT. Deși alte combinații de teste-MSA / DNase/TCT (plasmă umană) și MSA / TCT (plasmă umană) au avut specificitate de 100%, au avut sensibilitate variabilă (75% și, respectiv, 33%). În această linie, o combinație de MSA / DNase / TCT (plasmă umană) este mai bună la identificarea Staphylococcus aureus (specificitate 100%, sensibilitate 75%) decât combinația MSA/TCT (plasmă umană) (specificitate 100%, sensibilitate 33%)., De asemenea, combinațiile DNase/TCT (plasma ovinelor) și MSA/TCT (plasma ovinelor) și MSA/DNase/TCT (plasma ovinelor) au avut o specificitate absolută (100%), dar cu sensibilitate variabilă (50%, 25% și, respectiv, 67%).astfel, eficiența coagulazei tubului poate fi îmbunătățită prin testarea simultană care include atât DNase, cât și MSA. Pentru sensibilitate și specificitate mai mari, identificarea continuă a Staphylococcus aureus poate începe cu MSA, DNase și apoi TCT. De remarcat, specificitatea îmbunătățită a TCT nu a modificat semnificativ sensibilitatea ridicată observată inițial., Utilizarea MSA înainte de TCTs / DNase este foarte recomandată datorită factorului de aglomerare negativ și stafilococilor pozitivi ai coagulazei tubului care sunt din ce în ce mai recuperați din infecțiile umane. Aceste izolate produc, de asemenea, o Dnază stabilă la căldură și pot fi identificate greșit ca Staphylococcus aureus. Cu toate acestea, aceste tulpini pot fi diferențiate de Staphylococcus aureus prin eșecul lor de a produce acid din maltoză, lactoză și manitol. În plus, rare tulpini de Staphylococcus aureus poate fi coagulazo negativ , totuși, animale izolate (S. intermidius, S. hyicus, S. delphini și S. schleiferi subsp., coagulani) poate fi tub coagulază pozitiv; diferențierea acestora necesită, de asemenea, o creștere pe MSA.

valorile Predictive

creșterea pe MSA a avut cea mai mare valoare predictivă negativă (NPV) urmată de DNase, în timp ce coagulaza de tub a avut cea mai mică NPV (care nu corespunde sensibilității ridicate observate inițial, vezi Tabelul 3). În schimb, combinațiile de teste au dat NPV absolut (100%), cu excepția DNase/MSA (NPV de 92%), tabelul 3., VNI ridicate ale combinațiilor de testare, în special cele care implică TCT, arată că combinațiile de testare pot fi utilizate în mod fiabil în identificarea de rutină a Staphylococcus aureus. DNase a avut cea mai mare valoare predictivă pozitivă (PPV), urmată de MSA (96% și, respectiv, 83%). În schimb, coagulaza tubulară în monoterapie a determinat Vpp medii (54% și 50%), vezi Tabelul 3. Interesant, testul combinații au rezultat în mare PPVs, cu cele care implică DNase cu cea mai mare PPVs (95%), vezi tabelul 3., Astfel, în ceea ce privește VNI, specificitatea TCT poate fi îmbunătățită printr-o identificare simultană a izolatelor cu DNase și MSA.prin urmare, identificarea ideală a izolatelor clinice Staphylococcus aureus necesită o baterie de teste. Infecțiile cu Staphylococcus aureus sunt mai frecvente decât cele ale altor bacterii, în special în medii cu prevalență HIV/SIDA ridicată . Acest lucru garantează identificarea corectă a izolatelor pentru a obține rezultate mai bune ale tratamentului., Deoarece sunt prezentate opțiuni pentru îmbunătățirea sensibilității și specificității, aceste date se vor îmbunătăți în ceea ce privește identificarea aureusului stafilococ în probele clinice.pentru identificarea de rutină a Staphylococcus aureus din probele clinice, recomandăm utilizarea simultană a tuturor celor trei teste (începând cu creșterea pe MSA, DNase și coagulaza tubulară) în setările în care plasmele de iepure sau de cal nu sunt ușor disponibile., Se recomandă Screening-ul plasmelor de la alte specii (cum ar fi iepure, capră, porc și bovine), care pot fi mai ieftine și mai sigure și raportate a fi mai eficiente decât plasma umană cu TCT. În plus, genotiparea izolatelor stafilococice clinice este recomandată pentru specificarea izolatelor contra și pentru determinarea prevalenței Staphylococcus aureus rare și a izolatelor animale la exemplarele umane din Uganda.