a Antiglobulina, ou teste de Coombs faz parte dos testes de compatibilidade a que qualquer paciente que receba uma transfusão de glóbulos vermelhos deve ser submetido. Este teste também é essencial no trabalho de diagnóstico de pacientes com anemia cuja origem não é fácil de determinar e quando a etiologia deve ser identificada com precisão.em 1945, Robin Coombs, Arthur Mourant e Rob Race descreveram um teste para detectar anticorpos anti-Rho (anti-D) não-aglutinantes.,Originalmente, o teste foi concebido por Robin Coombs como parte de seus estudos de pós-graduação no Race and Mourant’s laboratory em Cambridge, Inglaterra, em 1945. Seu objetivo era estudar as características dos anticorpos envolvidos no contexto do que foi conhecido como fetal erythroblastosis, que agora é conhecida como doença hemolítica do recém-nascido (HDN), causada mais freqüentemente por razões de incompatibilidade entre um Rh negativo mãe sensibilizada durante uma gravidez anterior, que produz anticorpos IgG anti-D anticorpos capazes de passar a barreira da placenta, devido ao seu pequeno tamanho, em seguida, cobrir os fetal células vermelhas do sangue., Estes são mais tarde fagocitosados no baço e fígado, órgãos que, além de suas outras funções, manter a hematopoiese extramedular no feto para compensar a anemia resultante da hemólise. Mais tarde, o teste de Coombs foi usado para demonstrar a presença de anticorpos incompletos que cobriram os eritrócitos in vivo, como é visto em casos de anemia hemolítica autoimune (AHA). The description of the method, and its application in various hematological diseases, was published in The Lancet and the British Journal of Experimental Pathology in 1945 and 1946, respectively.,2

Os princípios da antiglobulin de teste são as seguintes: quando imunoglobulinas da classe IgG (gama globulina) e o complementar (beta globulina) de origem humana é injetado em diferentes coelhos, eles produzem anticorpos IgG contra estes globulinas, que depois são misturados em laboratório para produzir um amplo espectro de Coombs reagente, que é usado no dia-a sangue prática bancária., As moléculas de Antiglobulina IgG do coelho atuam como uma ponte, que une os anticorpos IgG incompletos cobrindo os glóbulos vermelhos adjacentes, causando aglutinação e visualização da reação a olho nu, que pode ser visto em um tubo de teste ou cartão de gel, interpretado como um teste de Coombs positivo.existem duas variantes deste ensaio. Quando é utilizado para detectar anticorpos ligados aos eritrócitos in vivo, é conhecido como teste directo de Antiglobulina ou teste directo de Coombs., Por outro lado, quando a Antiglobulina é utilizada para detectar in vitro a presença de anticorpos livres no soro após incubação na fase de Coombs da combinação cruzada, é conhecida como teste indirecto de Antiglobulina ou teste indirecto de Coombs. Esta variante do teste é a utilizada na detecção de anticorpos anti-D no soro materno de mulheres com antigénio d negativo, bem como na pesquisa e identificação de anticorpos no soro quando é utilizado um painel de eritrócitos comerciais, cujo fenótipo é conhecido.,3,4 aplicações

O teste de Coombs directo

• na investigação de anticorpos, tais como em doentes com anemia hemolítica auto-imune.

na investigação de aloanticorpos, tais como em recém-nascidos que sofrem de doença hemolítica do recém-nascido.

• para documentar uma reacção de transfusão hemolítica.

o teste indirecto de Coombs

• na detecção de anticorpos irregulares no soro do doente.na determinação dos fenótipos de glóbulos vermelhos.

• Como parte do teste de crossmatch.,métodos manuais e automáticos para o teste de Coombs podem ser considerados, em geral: (1) técnicas de tubo de ensaio, que eram tradicionais e agora são praticamente não utilizadas, (2) técnicas de microplacas e (3) técnicas de aglutinação em colunas de gel. Os métodos de fase sólida (gel, contas de vidro e microplates) apareceram na década de 90 e têm visto uso generalizado no México desde o ano 2000. Atualmente, a técnica mais usada é a de cartões com colunas de gel.

  O Teste do Gel

  em 1990, Lapierre desenvolveu um sistema de testes do gel.,Estas foram baseadas na utilização de partículas de gel de dextran acrilamida, uma matriz de gel que actuou como filtro, impedindo que os glóbulos vermelhos aglutinados passassem e, assim, prendendo os glóbulos vermelhos na superfície do gel de acordo com a sua dimensão, o que constitui um teste positivo. Uma reação negativa forma um botão de glóbulos vermelhos não aglutinados na parte inferior do microtubo., O cartão de gel contém 6 microtubos, o que permite a determinação de 6 antígenos e anticorpos diferentes, geralmente ABO tipo sanguíneo (direto e inverso) e Rh (antígeno D), testes de compatibilidade e testes de Coombs. Estes testes podem ser realizados manualmente ou automaticamente.,5

  Entre as vantagens da automação são os seguintes: um maior número de amostras que podem ser analisadas, lavou-se as hemácias não são necessários, a precisão e a reprodutibilidade são melhores, a subjetividade na interpretação dos resultados é eliminada, os resultados podem ser preservados por horas, e o trabalho manual é reduzido, minimizando a suscetibilidade ao erro nas diferentes fases do teste.quando o teste de Antiglobulina directa é positivo, isto significa que estão presentes nos eritrócitos anticorpos ou fragmentos incompletos de IgG do complemento (especificamente C3d)., Por outro lado, quando não há aglutinação (um teste negativo), estes anticorpos não estão presentes na superfície dos eritrócitos (Fig. 1).6

  

  a Figura 1. interpretação dos resultados dos testes de globulina ou Coombs anti-humana.

  (0, 14 MB).,

  Um negativo teste de Coombs direto não significa necessariamente que não há incompleta anticorpos nas células vermelhas do sangue, uma vez que o habitual reagentes para humanos polyspecific antiglobulins, que são utilizados diariamente nos bancos de sangue, só reagem quando há pelo menos 200 moléculas de IgG ou mais por eritrócitos. Da mesma forma, se o anticorpo envolvido for uma IgA, como em alguns casos de anemia hemolítica autoimune, o teste será negativo, uma vez que o reagente padrão de Coombs não contém anticorpos anti-IgA.,7,8

  O teste de Coombs indireto

  A indireta humanos antiglobulin teste é positivo quando há livre de anticorpos IgG no soro, como é o caso da doença hemolítica do recém-nascido, o teste também é rotineiramente utilizados para a identificação de irregular (inesperado) anticorpos empregando um comercial do painel de células vermelhas do sangue (Fig. 1).,6

  Em conclusão, desde a sua introdução ao laboratório clínico, de 70 anos, o teste de Coombs evoluiu tecnicamente, e seus princípios continuam a ser aplicáveis hoje, o que o torna simples e económica de teste, um dos mais versáteis e importantes utilizados no diagnóstico de doenças hematológicas, e a prática segura de hemoterapia.financiamento não foi concedido apoio financeiro.

  conflito de interesses

  os autores não têm conflitos de interesses a declarar.