Contagem de células com Hemocitómetro

o hemocitómetro é dividido em 9 quadrados principais de 1 mm x 1 mm de tamanho. Os quatro quadrados coner (identificados pelo quadrado vermelho) são subdivididos em 4 x 4 grades. A altura da Câmara formada com o vidro de cobertura é de 0, 1 mm, pelo que uma câmara de 1 mm x 1 mm x 0, 1 mm tem um volume de 0, 1 mm3 ou 10-4 ml.para contagem das células utilizando um hemocitómetro, adicionar 15-20 µl de suspensão celular entre o hemocitómetro e o vidro de cobertura utilizando um Pipetman P-20., O objetivo é ter cerca de 100-200 células / quadrado. Conte o número de células em todos os quatro quadrados exteriores dividir por quatro (o número médio de células/quadrado). Número de células por quadrado x 104 = número de células/ml de suspensão. Este protocolo funciona bem para células de mamíferos aderentes que tenham sido tripsinizadas ou para células de suspensão, incluindo células de inseto Sf9. Os glóbulos vermelhos são normalmente muito pequenos e numerosos para este protocolo e utilizam o quadrado médio em vez disso.quando terminar, pulverize o hemocitómetro e cubra o escorrega com etanol a 70% para matar as células., Lavar ambos com água desionizada e secar com um Kimwipe. Embrulhe um Kimwipe limpo e volte para a caixa de armazenamento. Note-se que as folhas de cobertura para o hemocitómero são feitas de um vidro especial mais espesso/achatado. Por favor, tente evitar quebrá-lo ou perdê-lo. Se o fizer, reordene as folhas de cobertura hemocitomérica, não as folhas de cobertura regulares.

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