o teste da Coagulase é o único método mais confiável para a identificação de Staphylococcus aureus. A produção de Coagulase pode ser detectada através do ensaio da coagulase deslizante (SCT) ou do ensaio da coagulase tubular (TCT)., A coagulase deslizante detecta a coagulase ligada (também chamada de “fator de aglomeração”) , que reage diretamente com fibrinogénio no plasma, causando uma aglutinação celular rápida. Os isolados negativos após a TCC requerem confirmação com TCT superior, uma vez que as estirpes deficientes em factor de aglomeração geralmente produzem coagulase livre. A coagulase do tubo detecta a coagulase livre extracelular secretada que reage com uma substância no plasma chamada “Factor de reacção da Coagulase” (CRF) para formar um complexo, que por sua vez reage com fibrinogénio para formar fibrina (o coágulo) ., Estirpes de estafilococos coagulase-positivos-animais foram isoladas de espécimes clínicos humanos, mas alguns isolados de estafilococos animais também fermentam manitol . Este estudo avaliou o desempenho de TCTs, DNase e MSA, os métodos fenotípicos comumente utilizados na identificação de Staphylococcus aureus.

detecção de Staphylococcus aureus com os testes fenotípicos disponíveis

PCR-amplificação do gene nuc, que foi utilizado como teste de base, detectou 32 Staphylococcus aureus dos 60 isolados estafilocócicos, Ver Tabela 2., Dos 32 isolados de Staphylococcus aureus positivos à nuc, a MSA detectou o número mais elevado de isolados (30 de 32, 94%), enquanto o TCT (plasma humano e ovino, respectivamente) detectou 29 e 27 dos 32 isolados (91% e 84%, respectivamente), Tabela 2. A DNase detectou o menor número de isolados (24 de 32, 75%).

Nove dos 32 nuc-positiva Staphylococcus aureus isolados (28%) foram coagulase negativos, o que implica que alguns isolados podem ser reconhecidas pela TCT como um único teste. Os Staphylococcus aureus coagulase negativos podem provavelmente ser isolados de MRSA que reagem fraca ou negativamente com TCTs , ou estirpes raras de Staphylococcus aureus que são notificadas como coagulase negativa . Dois isolados de Staphylococcus aureus (6%) também foram MSA negativos., Shittu et al também relataram Staphylococcus aureus negativo para manitol que era resistente à meticilina . Além disso, oito dos 32 isolados nuc positivos de Staphylococcus aureus foram DNase negativos (25%). Rao et al reportaram DNase negativo Staphylococcus aureus, mas sem explicação para estes achados . Seis isolados de Staphylococcus aureus, com excepção dos isolados de Staphylococcus aureus confirmados pela nuc, produziram colónias amarelas em MSA, tendo outros investigadores relatado resultados semelhantes . Outro achado raro neste estudo foi um isolado que era positivo para DNase, mas negativo para MSA e coagulase-negativa para tubo (i.e., não-Staphylococcus aureus). Presumimos que este isolado possa ter sido Staphylococcus schleiferi subsp. coagulanos, que, de acordo com o método padrão nacional, também é DNase positivo .os testes fenotípicos únicos são ineficientes para a identificação de Staphylococcus aureus.usámos sensibilidade e especificidade para avaliar o desempenho de testes individuais na detecção de Staphylococcus aureus., O crescimento com MSA foi o mais sensível (sensibilidade de 94%), seguido pelo TCT (plasma humano e ovino, sensibilidade de 91% e 81%, respectivamente), enquanto o teste DNase foi o menos sensível (sensibilidade de 75%). Inversamente, o teste DNase foi o mais específico (96% de especificidade) seguido de MSA (79% de especificidade), enquanto o TCT (plasma humano e plasma ovino) foi o menos específico (11% e 7%, respectivamente), quadro 3. Globalmente, dos testes individuais estudados, o crescimento com MSA foi o melhor na identificação de Staphylococcus aureus (sensibilidade de 94% e especificidade de 79%)., Os nossos resultados diferem ligeiramente dos da Han et al, que relataram sensibilidade e especificidade de 76,5% e 99,6%, respectivamente, para a MSA . D’Souza et al, também relatou sensibilidade de 71%, um pouco menor que a nossa . A elevada sensibilidade da MSA na detecção de Staphylococcus aureus pode dever-se à sua capacidade de isolar Staphylococcus aureus patogénico, diferenciando estafilococos coagulase negativos dos estafilococos coagulase positivos.,

Para a coagulase em tubo, plasma humano foi mais sensível do que ovelhas plasma (91% vs. 81% de sensibilidade), o que implica que a utilização ovelhas de plasma com TCTs pode detectar mais de falsos negativos isolados. Assim, neste contexto, é pouco provável que o plasma de ovinos substitua o plasma humano por TCTs de rotina., Os nossos dados estão de acordo com descobertas anteriores em que a sensibilidade de 94-100% foi relatada por outros investigadores . No entanto, neste estudo, a sensibilidade para o plasma humano e ovino foi superior ao que foi notificado noutros contextos, em que foram notificados valores tão baixos como 54, 5% (plasma humano) e 45, 5% (plasma de ovinos). Assim, com os testes de coagulase, o desempenho plasmático varia com a configuração e a escolha do plasma pode influenciar a eficiência do teste. Além disso, o uso de EDTA ou citrato como anticoagulante influencia o desempenho do teste., Notável, o citrato afeta apenas reações coagulase de enterococos onde é utilizado, mas não afeta organismos produtores de coagulase, como Staphylococcus aureus.

O teste de DNase tinha uma sensibilidade de 75% e uma especificidade de 96%, que são comparáveis a outros estudos em que uma sensibilidade de 75% e uma especificidade de 100% foram relatados . Neste estudo, o teste DNase foi o mais específico de todos os testes e teve o menor número de isolados falsos positivos (havia apenas um falso positivo)., Isto estava de acordo com outros relatórios, nos quais o teste DNase foi relatado como superior ao TCT . O crescimento do MSA foi também altamente específico (79% de especificidade), enquanto o teste menos específico foi a coagulase tubular (plasma humano e ovino, 11% e 7% de especificidade, respectivamente).em contrapartida, outros estudos referiram elevada especificidade (93, 6%) para o plasma humano e ovino com TCTs ., A baixa especificidade em nosso estudo pode ser em parte devido à não detecção específica de outros coagulase positivos, estafilococos, tais como Staphylococcus schleiferi subespécies coagulans, Staphylococcus delphini, Staphylococcus intermedius e Staphylococcus hyicu s. S. delphini e Staphylococcus intermedius são raros os isolados clínicos, enquanto que Staphylococcus hyicu s é indeterminado (com prevalência variando de 11% a 89% ). A prevalência destes isolados pode ser elevada em certos contextos., Embora a MSA e a DNase tivessem alta especificidade e sensibilidade, como testes individuais, o seu uso na identificação de rotina de Staphylococcus aureus é restringido pela sua capacidade de detectar outros isolados bacterianos , e são principalmente utilizados durante telas iniciais . De facto, foram notificados contras positivos ao sal de manitol (Staphylococcus caprae, S. hemolyticus e S. saprophyticus) na Nigéria e no Japão ., Assim, em certos contextos, se utilizados individualmente para identificar Staphylococcus aureus, os testes fenotípicos comuns podem ser insuficientes; alguns isolados serão equivocados, seja como Staphylococcus aureus ou conts.uma combinação de MSA e DNase melhora o teste da coagulase do tubo

avaliámos então a sensibilidade e especificidade das combinações de ensaio (ou seja, MSA/DNase/TCT) na detecção de Staphylococcus aureus, com o objectivo de melhorar o desempenho do TCT., Atingimos especificidade absoluta (100%) na detecção de Staphylococcus aureus com combinações de teste, com excepção da combinação DNase/MSA (especificidade de 92%). Inversamente, a sensibilidade das combinações de ensaio variou, sendo o MSA/DNase/TCT (plasma humano) o mais sensível (sensibilidade de 75%), enquanto o MSA/DNase/TCT (Plasma ovino) foi o menos sensível (sensibilidade de 25%), Tabela 3.uma combinação de MSA / DNase resultou em especificidade e sensibilidade de 92% e 96%, respectivamente, e esta seria a combinação de escolha para a identificação de Staphylococcus aureus., No entanto, uma vez que ambos os testes não são específicos de Staphylococcus aureus e podem detectar outros isolados bacterianos, a dupla combinação só pode ser usada para melhorar o TCT. Embora outras combinações de teste-MSA/DNase/TCT (plasma humano) e MSA / TCT (plasma humano) tivessem especificidade de 100%, apresentavam sensibilidade variável (75% e 33%, respectivamente). Nesta linha, uma combinação de MSA/DNase/TCT (plasma humano) é melhor na identificação de Staphylococcus aureus (especificidade de 100%, sensibilidade de 75%) do que a associação MSA/TCT (plasma humano) (especificidade de 100%, sensibilidade de 33%)., Do mesmo modo, as combinações DNase/TCT (plasma de ovinos) e MSA/TCT (plasma de ovinos) e MSA/DNase/TCT (plasma de ovinos) tinham uma especificidade absoluta (100%) mas com sensibilidade variável (50%, 25% e 67%, respectivamente).assim, a eficiência da coagulase do tubo pode ser melhorada através de testes simultâneos que incluem DNase e MSA. Para maior sensibilidade e especificidade, a identificação sequela de Staphylococcus aureus pode começar com MSA, DNase e, em seguida, TCT. Digno de nota, a especificidade melhorada do TCT não alterou significativamente a sensibilidade elevada inicialmente observada., A utilização de MSA antes da TCTs/DNase é altamente recomendada devido ao factor de aglomeração negativo e estafilococos coagulase positiva que estão cada vez mais a ser recuperados a partir de infecções humanas. Estes isolados também produzem uma DNase estável ao calor e podem ser erroneamente identificados como Staphylococcus aureus. No entanto, estas estirpes podem ser diferenciadas de Staphylococcus aureus pela sua incapacidade de produzir ácido a partir de maltose, lactose e manitol. Além disso , estirpes raras de Staphylococcus aureus podem ser coagulase negativas, mas isolados animais (S. intermidius, S. hyicus, S. delphini e S. schleiferi subsp., coagulanos) podem ser coagulase do tubo positivo ; a diferenciação destes também requer o crescimento em MSA.

valores preditivos

crescimento em MSA teve o valor preditivo negativo mais elevado (NPV) seguido de DNase, enquanto que a coagulase do tubo teve o valor NPV mais baixo (que não corresponde à elevada sensibilidade inicialmente observada, Ver Tabela 3). Inversamente, as combinações de ensaio deram NPVs absolutos (100%), com excepção do DNase/MSA (NPV de 92%), quadro 3., Os Val elevados das combinações de ensaio, em especial os que envolvem o TCT, revelam que as combinações de ensaio podem ser utilizadas de forma fiável na identificação de rotina de Staphylococcus aureus. A DNase teve o valor preditivo positivo mais elevado (PPV), seguido pelo MSA (96% e 83%, respectivamente). Inversamente, a coagulase dos tubos, por si só, resultou em PPV médios (54% e 50%), Ver quadro 3. Curiosamente, as combinações de ensaios resultaram em elevados PPVs, com os que envolvem a DNase tendo os PPV mais elevados (95%), ver quadro 3., Assim, no que se refere aos NPVs, a especificidade do TCT pode ser melhorada através da identificação simultânea dos isolados com a DNase e a MSA.assim, a identificação ideal de isolados clínicos de Staphylococcus aureus requer uma série de testes. As infecções por Staphylococcus aureus são mais frequentes do que as de outras bactérias, particularmente em contextos com elevada prevalência de VIH/SIDA . Isso justifica a identificação correta dos isolados para alcançar melhores resultados de tratamento., Uma vez que são apresentadas opções para melhorar a sensibilidade e especificidade, estes dados irão melhorar a identificação de aureus estafilocócico em espécimes clínicos.recomendações para a identificação de rotina de Staphylococcus aureus a partir de amostras clínicas, recomenda-se a utilização simultânea de todos os três testes (começando com o crescimento em MSA, DNase e coagulase tubular) em situações em que os plasmas de coelho ou de cavalo não estejam prontamente disponíveis., Recomenda-se o rastreio de plasmas de outras espécies (como coelhos, cabras, suínos e bovinos), que podem ser mais baratos e mais seguros e que dizem ser mais eficientes do que o plasma humano com TCTs. Além disso, recomenda-se a genotipagem de isolados clínicos estafilocócicos para especializar isolados de CoNS e para determinar a prevalência de isolados raros de Staphylococcus aureus e animais em espécimes humanos no Uganda.