test ten wykazuje obecność katalazy, enzymu katalizującego uwalnianie tlenu z nadtlenku wodoru (H2O2). Jest on stosowany w celu odróżnienia tych bakterii, które produkują enzymu katalazy, takich jak gronkowce, od bakterii wytwarzających nie katalazy, takich jak paciorkowce. Zwykle 3% H2O2 jest używane do rutynowej hodowli, podczas gdy 15% H2O2 jest używane do wykrywania katalazy w beztlenowych.,
zasada testu katalazy
enzym katalaza pośredniczy w rozpadie nadtlenku wodoru na tlen i wodę. Obecność enzymu w izolacie bakterii jest widoczna, gdy małe inokulum jest wprowadzane do nadtlenku wodoru i następuje szybkie opracowanie pęcherzyków tlenu. Brak katalazy objawia się brakiem lub słabą produkcją pęcherzyków. Kultura nie powinna mieć więcej niż 24 godziny.,
bakterie chronią się w ten sposób przed śmiertelnym działaniem nadtlenku wodoru, który gromadzi się jako końcowy produkt tlenowego metabolizmu węglowodanów.
cel lub zastosowania testu Catalazy
- morfologicznie podobne Enterococcus Streptococcus (Catalase ujemny) i Staphylococcus (catalase dodatni) można różnicować za pomocą testu catalase.
- również cenne w różnicowaniu bakterii tlenowych i beztlenowych.
- do identyfikacji Mycobacterium tuberculosis stosuje się półwytrawny test katalazy.,
- stosuje się go w celu odróżnienia aerotolerantowych szczepów Clostridium, które są ujemne katalazy, od gatunków Bacillus, które są dodatnie.
- Test katalazy może być stosowany jako pomoc w identyfikacji Enterobacteriaceae.
procedura testu katalazy
- wlać 1-2 ml roztworu nadtlenku wodoru do probówki.
- używając sterylnego drewnianego patyczka lub szklanego pręta, należy wziąć kilka kolonii od 18 do 24 godzin badanego organizmu i zanurzyć w roztworze nadtlenku wodoru.
- ,
metoda ślizgania
- użyj pętli lub sterylnego drewnianego patyczka, aby przenieść niewielką ilość wzrostu kolonii na powierzchnię czystego, suchego szkiełka.
- umieść kroplę 3% H2O2 w szklanym szkiełku.
- Obserwuj ewolucję pęcherzyków tlenu.
interpretacja wyniku testu katalazy i przykłady
pozytywny: wytworzone obfite pęcherzyki, aktywne pęcherzyki
przykłady: gronkowce, Micrococci, Listeria, Corynebacterium diphtheriae, Burkholderia cepacia, Nocardia, Rodzina Enterobacteriaceae (Citrobacter, E., coli, Enterobacter, Klebsiella, Shigella, Yersinia, Proteus, Salmonella, Serratia), Pseudomonas, Mycobacterium tuberculosis, Aspergillus, Cryptococcus i Rhodococcus equi.
ujemny: brak lub bardzo mało pęcherzyków.
przykłady: Streptococcus i Enterococcus spp
Kontrola jakości testu Catalazy
pozytywne: Staphylococcus aureus– ATCC 33592
negatywne: Enterococcus faecalis– ATCC 29212
środki ostrożności testu Catalazy
- organizmy testowe nie powinny być pobierane z hodowli agaru krwi., Czerwone krwinki zawierają katalazę, a ich obecność daje fałszywie dodatni test.
- kultura powinna mieć od 18 do 24 godzin.
- nadtlenek wodoru musi być świeży, ponieważ jest bardzo niestabilny.
- nie należy używać pętli z drutu Żelaznego.
- niektóre bakterie wytwarzają peroksydazę, która katalizuje rozpad nadtlenku wodoru, powodując, że reakcja jest słabo dodatnia; (kilka pęcherzyków rozwija się powoli). Nie należy tego mylić z prawdziwie pozytywną reakcją.
- nie dodawać organizmu do odczynnika, szczególnie w przypadku stosowania pętli szczepiących zawierających żelazo., Pętle zawierające żelazo powodują fałszywie dodatnie wyniki testu w przypadku narażenia na nadtlenek wodoru.