coagulase testing is the single most reliable method for identifying Staphylococcus aureus. Wytwarzanie koagulazy można wykryć za pomocą ślizgowego testu koagulazy (SCT) lub testowego testu koagulazy (TCT)., Ślizgowa koagulaza wykrywa związaną koagulazę (zwaną również „czynnikiem zlepiającym”), która reaguje bezpośrednio z fibrynogenem w osoczu, powodując szybką aglutynację komórek. Ujemne Izolaty po SCT wymagają potwierdzenia z superior TCT, ponieważ szczepy z niedoborem czynnika zlepiającego zwykle wytwarzają wolną koagulazę. Koagulaza rurkowa wykrywa wydzielaną zewnątrzkomórkową wolną koagulazę, która reaguje z substancją w osoczu zwaną „czynnikiem koagulazy reagującym” (CRF), tworząc kompleks, który z kolei reaguje z fibrynogenem, tworząc fibrynę (skrzep)., Szczepy koagulazo-dodatnich gronkowców zwierzęcych zostały wyizolowane z ludzkich próbek klinicznych, jednak niektóre szczepy gronkowców zwierzęcych fermentują również mannitol . W badaniu oceniano skuteczność TCTs, DNase i MSA, metod fenotypowych powszechnie stosowanych w identyfikacji Staphylococcus aureus.

wykrywanie Staphylococcus aureus za pomocą dostępnych testów fenotypowych

PCR-amplifikacja genu nuc, który został użyty jako test wyjściowy, wykryło 32 Staphylococcus aureus z 60 szczepów gronkowców, patrz Tabela 2., Spośród 32 izolatów gronkowca złocistego (nuc-positive Staphylococcus aureus), MSA wykryło największą liczbę izolatów (30 z 32, 94%), podczas gdy TCT (osocze ludzkie i Owcze) wykryło 29 i 27 Z 32 izolatów (odpowiednio 91% i 84%), tabela 2. Dnaza wykryła najmniejszą liczbę izolatów (24 Z 32, 75%).

dziewięć z 32 izolatów Staphylococcus aureus (28%) było koagulazo-ujemnych, co oznacza, że niektóre Izolaty mogą być błędnie zidentyfikowane przez TCT jako jedyny test. Koagulazo-ujemne Staphylococcus aureus mogą być prawdopodobnie izolatami MRSA, które reagują słabo lub negatywnie z TCT , lub rzadkimi szczepami Staphylococcus aureus, które są zgłaszane jako koagulazo-ujemne . Dwa Izolaty Staphylococcus aureus (6%) były również ujemne., Shittu i wsp. zgłaszali również mannitol ujemny Staphylococcus aureus, który był oporny na metycylinę . Ponadto, osiem z 32 izolatów gronkowca złocistego (staphylococcus aureus) było Dnazo-ujemnych (25%). Rao i wsp. zgłaszali Staphylococcus aureus ujemny na obecność DNazy, ale bez wyjaśnienia tych ustaleń . Sześć gronkowców, poza potwierdzonymi przez nuc izolatami Staphylococcus aureus, wytwarzało żółte kolonie na MSA, a podobne wyniki zgłosili inni badacze . Innym rzadkim stwierdzeniem w tym badaniu był izolat, który był Dnazo dodatni, ale MSA-ujemny i koagulazo ujemny (tj., nie-Staphylococcus aureus). Przypuszczamy, że izolat ten mógł być Staphylococcus schleiferi subsp. koagulany, które zgodnie z Krajową metodą standardową są również Dnazo dodatnie .

pojedyncze testy fenotypowe są nieskuteczne w identyfikacji gronkowca złocistego

wrażliwość i swoistość wykorzystaliśmy do oceny skuteczności poszczególnych testów w wykrywaniu gronkowca złocistego., Wzrost na MSA był najbardziej wrażliwy (Czułość 94%), następnie TCT (osocze ludzkie i Owcze, czułość odpowiednio 91% i 81%), podczas gdy test DNase był najmniej wrażliwy (czułość 75%). I odwrotnie, badanie DNazy było najbardziej specyficzne (96% swoistości), a następnie MSA (79% swoistości), podczas gdy TCT (osocze ludzkie i osocze owiec) było najmniej specyficzne (odpowiednio 11% i 7%), tabela 3. Ogólnie, spośród poszczególnych badanych testów, wzrost na MSA był najlepszy w identyfikacji Staphylococcus aureus(Czułość 94% i swoistość 79%)., Nasze wyniki nieznacznie różnią się od wyników Han et al, którzy zgłosili czułość i swoistość odpowiednio 76,5% i 99,6% dla MSA . D ' Souza et al, odnotowano również czułość 71%, nieco niższą niż nasza . Wysoka czułość MSA w wykrywaniu Staphylococcus aureus może wynikać z jego zdolności do izolowania patogennego Staphylococcus aureus, różnicowania gronkowców koagulazo-ujemnych od gronkowców koagulazo-dodatnich.,

w przypadku koagulazy rurkowej ludzkie osocze było bardziej wrażliwe niż osocze owiec (czułość 91% vs.81%), sugerując, że stosowanie osocza owiec z TCT może wykryć więcej fałszywie ujemnych izolatów. Tak więc, w tym ustawieniu, jest mało prawdopodobne, że osocze owiec zastąpi ludzkie osocze dla rutynowych TCT., Nasze dane są zgodne z wcześniejszymi ustaleniami, w których czułość 94-100% była zgłaszana przez innych badaczy . Jednak w tym badaniu wrażliwość na osocze ludzkie i Owcze była wyższa niż w innych warunkach, gdzie wartości tak niskie, jak 54,5% (osocze ludzkie) i 45,5% (osocze Owcze). Dlatego w przypadku testów koagulazowych wydajność osocza zmienia się w zależności od ustawienia, a wybór osocza może wpływać na skuteczność testu. Również stosowanie EDTA lub cytrynianu jako antykoagulanta wpływa na wydajność testu., Warto zauważyć, cytrynian wpływa tylko na reakcje koagulazy w enterokokach, gdzie jest wykorzystywany, ale nie wpływa na organizmy wytwarzające koagulazę, takie jak Staphylococcus aureus.

Test DNazy miał czułość 75% i swoistość 96%, które są porównywalne z innymi badaniami, w których zgłaszano czułość 75% i swoistość 100%. W badaniu tym Test DNazy był najbardziej specyficzny ze wszystkich testów i zawierał najmniejszą liczbę fałszywie dodatnich izolatów (był tylko jeden fałszywie dodatni)., Było to zgodne z innymi doniesieniami, w których Test DNazy został zgłoszony jako lepszy od TCT . Wzrost MSA był również wysoce swoisty (79% swoistości), podczas gdy najmniej swoistym testem była koagulaza probówkowa (osocze ludzkie i Owcze, odpowiednio 11% i 7% swoistości).

natomiast inne badania wykazały wysoką swoistość (93,6%) osocza ludzkiego i owczego z TCT ., Niska swoistość w naszym badaniu może być częściowo spowodowana niespecyficznym wykryciem innych gronkowców koagulazo dodatnich, takich jak Staphylococcus schleiferi podgatunek coagulans, Staphylococcus delphini, Staphylococcus intermedius i Staphylococcus hyicu s. Staphylococcus delphini i Staphylococcus intermedius są rzadkimi izolatami klinicznymi, podczas gdy Staphylococcus hyicu s jest nieokreślony(z częstością od 11% do 89%). Częstość występowania tych izolatów może być wysoka w niektórych warunkach., Chociaż MSA i DNase miały wysoką specyficzność i wrażliwość, jako indywidualne testy, ich zastosowanie w rutynowej identyfikacji Staphylococcus aureus jest ograniczone przez ich zdolność do wykrywania innych izolatów bakteryjnych, i są najczęściej używane podczas wstępnych ekranów . Rzeczywiście, pozytywne wady soli mannitolu (Staphylococcus caprae, S. hemolyticus i S. saprophyticus) odnotowano w Nigerii i Japonii ., Tak więc, w niektórych warunkach, jeśli są stosowane indywidualnie do identyfikacji Staphylococcus aureus, wspólne testy fenotypowe mogą być niewystarczające; niektóre Izolaty będą błędnie identyfikowane, albo jako Staphylococcus aureus lub CoNS.

połączenie MSA i DNazy poprawia test koagulazy

następnie oceniliśmy czułość i swoistość kombinacji testowych (tj. MSA/DNase / TCT) przy wykrywaniu Staphylococcus aureus, mając na celu poprawę wydajności TCT., Uzyskaliśmy absolutną swoistość (100%) w wykrywaniu Staphylococcus aureus kombinacjami testowymi, z wyjątkiem kombinacji DNase/MSA (swoistość 92%). Natomiast czułość kombinacji badanych była różna, przy czym najbardziej czułe (czułość 75%) było MSA/DNase/TCT (osocze ludzkie), podczas gdy najmniej czułe (czułość 25%) było MSA/DNase / TCT (osocze owiec), tabela 3.

połączenie MSA / DNase spowodowało swoistość i czułość odpowiednio 92% i 96%, i byłaby to kombinacja wybierana do identyfikacji Staphylococcus aureus., Ponieważ jednak oba testy nie są specyficzne dla Staphylococcus aureus i mogą wykrywać inne Izolaty bakterii, Podwójna kombinacja może być stosowana tylko w celu poprawy TCT. Chociaż inne kombinacje testowe-MSA/DNase/TCT (osocze ludzkie) i MSA/TCT (osocze ludzkie) miały swoistość 100%, miały różną czułość (odpowiednio 75% i 33%). W tej linii połączenie MSA / DNase/TCT (osocze ludzkie) jest lepsze w identyfikacji Staphylococcus aureus (100% swoistości, 75% czułości) niż połączenie MSA/TCT (osocze ludzkie) (100% swoistości, 33% czułości)., Podobnie, kombinacje DNase/TCT (osocze owiec) i MSA/TCT (osocze owiec) oraz MSA/DNase/TCT (osocze owiec) miały bezwzględną swoistość (100%), ale z różną czułością (odpowiednio 50%, 25% i 67%).

w ten sposób wydajność koagulazy rurkowej można poprawić poprzez jednoczesne testowanie, które obejmuje zarówno Dnazę, jak i MSA. W celu uzyskania większej czułości i swoistości, identyfikacja Staphylococcus aureus może rozpocząć się od MSA, DNazy, a następnie TCT. Warto zauważyć, że poprawiona swoistość TCT nie zmieniła znacząco początkowo obserwowanej wysokiej czułości., Stosowanie MSA przed TCTs / DNase jest wysoce zalecane ze względu na ujemny czynnik zlepiania i gronkowce koagulazo-dodatnie z probówki, które są coraz częściej odzyskiwane z infekcji u ludzi. Izolaty te wytwarzają również Dnazę stabilną cieplnie i mogą być błędnie identyfikowane jako Staphylococcus aureus. Szczepy te można jednak odróżnić od Staphylococcus aureus przez brak wytwarzania kwasu z maltozy, laktozy i mannitolu. Ponadto rzadkie szczepy Staphylococcus aureus mogą być koagulazo-ujemne, ale izolowane zwierzęce (S. intermidius, S. hyicus, S. delphini i S. schleiferi subsp., koagulany) mogą być koagulazo-dodatnie; ich różnicowanie wymaga również wzrostu na MSA.

wartości prognostyczne

wzrost MSA miał najwyższą ujemną wartość prognostyczną (NPV), a następnie Dnazę, podczas gdy koagulaza rurkowa miała najniższą wartość NPV (która nie odpowiadała początkowo zaobserwowanej wysokiej czułości, patrz Tabela 3). Z drugiej strony, kombinacje testowe dały bezwzględne wartości NPV (100%) z wyjątkiem DNase/MSA (NPV 92%), tabela 3., Wysokie wartości NPV kombinacji testowych, szczególnie tych z udziałem TCT, pokazują, że kombinacje testowe mogą być niezawodnie stosowane w rutynowej identyfikacji Staphylococcus aureus. DNase miał najwyższą dodatnią wartość predykcyjną (PPV), a następnie MSA (odpowiednio 96% i 83%). I odwrotnie, sama koagulaza rurkowa powodowała średnie PPVs (54% i 50%), patrz Tabela 3. Co ciekawe, kombinacje testowe powodowały wysokie PPV, A te z udziałem DNazy miały najwyższe PPV (95%), patrz Tabela 3., Tak więc, jak w przypadku NPV, specyficzność TCT może zostać poprawiona przez jednoczesną identyfikację izolatów z Dnazą i MSA.

dlatego idealna identyfikacja izolatów klinicznych Staphylococcus aureus wymaga zestawu testów. Zakażenia Staphylococcus aureus są częstsze niż przez inne bakterie, szczególnie w środowiskach o wysokiej częstości występowania HIV / AIDS . Gwarantuje to prawidłową identyfikację izolatów w celu uzyskania lepszych wyników leczenia., Ponieważ przedstawiono możliwości poprawy czułości i swoistości, dane te poprawią identyfikację gronkowca złocistego w próbkach klinicznych.

zalecenia

w przypadku rutynowej identyfikacji Staphylococcus aureus z próbek klinicznych zalecamy jednoczesne stosowanie wszystkich trzech testów (począwszy od wzrostu na MSA, DNase i Koagulazie rurkowej) w miejscach, w których Plazma królika lub konia nie jest łatwo dostępna., Zaleca się przesiewanie plazmy z innych gatunków (takich jak króliki, kozy, świnie i bydło), które mogą być tańsze i bezpieczniejsze, i zgłaszane jako bardziej wydajne niż ludzkie osocze z TCT. Ponadto zaleca się genotypowanie klinicznych szczepów gronkowcowych w celu specjalizacji szczepów CoNS oraz określenia częstości występowania rzadkich szczepów Staphylococcus aureus i szczepów zwierzęcych u osobników ludzkich w Ugandzie.