Coagulasetest is de meest betrouwbare methode om Staphylococcus aureus te identificeren. De coagulaseproductie kan worden gedetecteerd met behulp van de slide coagulase test (SCT) of de tube coagulase test (TCT)., Dia coagulase detecteert gebonden coagulase (ook wel “klonterende factor”) , die direct reageert met fibrinogeen in plasma, waardoor snelle celagglutinatie. Negatieve isolaten na SCT vereisen bevestiging met de superieure TCT, aangezien stammen met een tekort aan klonteringsfactor gewoonlijk vrije coagulase produceren. Tube coagulase detecteert afgescheiden extracellulaire vrije coagulase die reageert met een stof in plasma genaamd “Coagulase-reagerende Factor” (CRF) om een complex te vormen, dat op zijn beurt reageert met fibrinogeen om fibrine (de stolsel) te vormen ., Stammen van coagulase-positieve dierlijke stafylokokken zijn geïsoleerd uit humane klinische specimens, maar sommige dierlijke stafylokokkenisolaten fermenteren ook mannitol . Deze studie evalueerde de prestaties van TCT ‘ s, DNase en MSA, de fenotypische methoden die algemeen worden gebruikt bij de identificatie van Staphylococcus aureus.
detectie van Staphylococcus aureus met de beschikbare fenotypische tests
PCR-amplificatie van het NUC-gen, dat als baseline-test werd gebruikt, detecteerde 32 Staphylococcus aureus van de 60 Staphylococcus-isolaten, zie Tabel 2., Van de 32 nuc-positieve Staphylococcus aureus-isolaten, detecteerde MSA het hoogste aantal isolaten (30 van de 32, 94%), terwijl het TCT (humaan en schapen-plasma respectievelijk) 29 en 27 van de 32 isolaten (respectievelijk 91% en 84%) detecteerde, tabel 2. DNase detecteerde het minste aantal isolaten (24 van 32, 75%).
negen van de 32 NUC-positieve Staphylococcus aureus-isolaten (28%) waren coagulase-negatief, wat impliceert dat sommige isolaten door de TCT als enige test verkeerd kunnen worden geïdentificeerd. De coagulase-negatieve Staphylococcus aureus kan waarschijnlijk MRSA-isolaten zijn die zwak of negatief reageren met TCT ‘ s , of zeldzame Staphylococcus aureus-stammen die coagulase-negatief zijn . Twee Staphylococcus aureus-isolaten (6%) waren ook MSA-negatief., Shittu et al rapporteerden ook mannitol negatieve Staphylococcus aureus die meticilline resistent was . Bovendien waren acht van de 32 nuc-positieve Staphylococcus aureus isolaten DNase-negatief (25%). Rao et al rapporteerden DNase-negatieve Staphylococcus aureus maar zonder verklaring voor deze bevindingen . Zes andere stafylokokken dan de door nuc bevestigde Staphylococcus aureus-isolaten produceerden gele kolonies op MSA, en soortgelijke bevindingen werden door andere onderzoekers gemeld . Een andere zeldzame bevinding in deze studie was een isolaat dat DNase positief was maar MSA-negatief en tube coagulase-negatief (d.w.z., niet-Staphylococcus aureus). We nemen aan dat dit isolaat Staphylococcus schleiferi subsp kan zijn. coagulans, die volgens de nationale standaardmethode ook DNase-positief is .
enkelvoudige fenotypische tests zijn inefficiënt voor de identificatie van Staphylococcus aureus
We gebruikten gevoeligheid en specificiteit om de prestaties van individuele tests bij het detecteren van Staphylococcus aureus te evalueren., De groei op MSA was het gevoeligst (94% gevoeligheid), gevolgd door de TCT (humaan en schapen plasma, respectievelijk 91% en 81% gevoeligheid), terwijl de DNase test het minst gevoelig was (75% gevoeligheid). Omgekeerd was de DNase-test de meest specifieke (96% specificiteit) gevolgd door MSA (79% specificiteit), terwijl de TCT (humaan plasma en schapen plasma) de minst specifieke was (respectievelijk 11% en 7%), tabel 3. In het algemeen was de groei op MSA van de onderzochte individuele testen het beste bij het identificeren van Staphylococcus aureus (94% gevoeligheid en 79% specificiteit)., Onze resultaten verschillen enigszins van die van Han et al, die gevoeligheid en specificiteit van 76,5% respectievelijk 99,6% voor MSA rapporteerden . D ‘ Souza et al, meldden ook gevoeligheid van 71%, iets lager dan de onze . De hoge gevoeligheid van MSA bij het detecteren van Staphylococcus aureus kan te wijten zijn aan zijn vermogen om pathogene Staphylococcus aureus te isoleren, waardoor coagulase-negatieve stafylokokken worden onderscheiden van coagulase-positieve stafylokokken.,
Voor tube coagulase was humaan plasma gevoeliger dan schapen plasma (91% vs.81% gevoeligheid), wat impliceert dat het gebruik van schapen plasma met TCT ‘ s kan detecteren meer vals negatieve isolaten. Dus, in deze omgeving, is het onwaarschijnlijk dat schapen plasma menselijk plasma zal vervangen voor routine TCT ‘ s., Onze gegevens zijn in overeenstemming met eerdere bevindingen waarbij gevoeligheid van 94-100% werd gemeld door andere onderzoekers . In deze studie was de gevoeligheid voor plasma bij mensen en schapen echter hoger dan in andere gevallen, waar waarden van slechts 54,5% (humaan plasma) en 45,5% (schapen plasma) werden gemeld . Daarom varieert de plasmaprestatie bij coagulasetests met de instelling en kan de keuze van het plasma de efficiëntie van de test beïnvloeden. Ook het gebruik van EDTA of citraat als antistollingsmiddel beïnvloedt de prestaties van de test., Opmerkelijk , beà nvloedt citraat slechts coagulasereacties van enterococcen waar het wordt gebruikt, maar beà nvloedt geen coagulase producerende organismen zoals goudhoudende Staphylococcus.
De DNase-test had een gevoeligheid van 75% en een specificiteit van 96%, die vergelijkbaar zijn met andere studies waarin een sensitiviteit van 75% en een specificiteit van 100% werden gemeld . In deze studie was de DNase-test de meest specifieke van alle tests en had het minste aantal vals-positieve isolaten (er was slechts één vals-positieve)., Dit was in overeenstemming met andere rapporten, waarin de DNase test werd gemeld als superieur aan de TCT . De groei op MSA was ook zeer specifiek (79% specificiteit), terwijl de minst specifieke test de tube coagulase was (humaan en schapen plasma, 11% en 7% specificiteit, respectievelijk).
in andere studies werd daarentegen een hoge specificiteit (93,6%) gemeld voor plasma bij mensen en schapen met TCT ‘ s ., De lage specificiteit in onze studie kan deels te wijten zijn aan de niet-specifieke detectie van andere coagulasepositieve stafylokokken, zoals Staphylococcus schleiferi ondersoorten coagulans, Staphylococcus delphini, Staphylococcus intermedius en Staphylococcus hyicu s. Staphylococcus delphini en Staphylococcus intermedius zijn zeldzame klinische isolaten terwijl Staphylococcus hyicu s onbepaald is (met prevalentie variërend van 11% tot 89% ). De prevalentie van deze isolaten kan hoog zijn in bepaalde settings., Hoewel MSA en DNase hoge specificiteiten en gevoeligheden hadden, als individuele tests , wordt hun gebruik in routine identificatie van goudhoudende Staphylococcus beperkt door hun capaciteit om andere bacteriële isolaten te ontdekken, en meestal gebruikt tijdens de eerste schermen . In Nigeria en Japan zijn inderdaad positieve nadelen van Mannitolzout (Staphylococcus caprae, S. hemolyticus en S. saprofyticus) gemeld ., Aldus, in bepaalde montages, indien afzonderlijk gebruikt om Staphylococcus aureus te identificeren, kunnen gemeenschappelijke fenotypische tests ontoereikend zijn; sommige isolaten zullen verkeerd worden geïdentificeerd, hetzij als Staphylococcus aureus of CoNS.
een combinatie van MSA en DNase verbetert de buiscoagulasetest
vervolgens evalueerden we de gevoeligheid en specificiteit van testcombinaties (d.w.z. MSA/DNase/TCT) bij het detecteren van Staphylococcus aureus, gericht op het verbeteren van de prestaties van de TCT., We bereikten absolute specificiteit (100%) bij het detecteren van Staphylococcus aureus met testcombinaties, met uitzondering van de DNase/MSA combinatie (92% specificiteit). Omgekeerd varieerde de gevoeligheid van testcombinaties, waarbij MSA/DNase/TCT (humaan plasma) het gevoeligst was (75% gevoeligheid), terwijl MSA/DNase/TCT (schapenplasma) het minst gevoelig was (25% gevoeligheid), tabel 3.
een combinatie van MSA/DNase resulteerde in specificiteit en gevoeligheid van respectievelijk 92% en 96%, en dit zou de voorkeurscombinatie zijn voor de identificatie van Staphylococcus aureus., Aangezien beide tests echter niet specifiek zijn voor Staphylococcus aureus en andere bacteriële isolaten kunnen detecteren, kan de dubbele combinatie alleen worden gebruikt om de TCT te verbeteren. Hoewel andere testcombinaties-MSA/DNase/TCT (humaan plasma) en MSA / TCT (humaan plasma) een specificiteit van 100% hadden, hadden ze een variërende gevoeligheid (respectievelijk 75% en 33%). In deze lijn is een combinatie van MSA/DNase/TCT (humaan plasma) beter in het identificeren van Staphylococcus aureus (100% specificiteit, 75% gevoeligheid) dan de MSA/TCT (humaan plasma) combinatie (100% specificiteit, 33% gevoeligheid)., Evenzo hadden de combinaties DNase/TCT (schapenplasma) en MSA/TCT (schapenplasma) en MSA/DNase / TCT (schapenplasma) een absolute specificiteit (100%) maar met wisselende gevoeligheid (respectievelijk 50%, 25% en 67%).
De efficiëntie van de tube coagulase kan dus worden verbeterd door gelijktijdige tests die zowel DNase als MSA omvatten. Voor hogere gevoeligheid en specificiteit, kan de vervolgidentificatie van goudhoudende Staphylococcus met MSA, DNase en dan TCT beginnen. Opmerkelijk is dat de verbeterde specificiteit van de TCT de aanvankelijk waargenomen hoge gevoeligheid niet significant veranderde., Het gebruik van MSA voorafgaand aan TCTs/DNase wordt sterk aanbevolen vanwege de klonterende factor negatieve en tube coagulase positieve stafylokokken die steeds meer worden hersteld van menselijke infecties. Deze isolaten produceren ook een hitte stabiele DNase en kunnen als goudhoudende Staphylococcus verkeerd worden geà dentificeerd. Nochtans, kunnen deze spanningen van Staphylococcus aureus worden onderscheiden door hun mislukking om zuur van maltose, lactose en mannitol te produceren. Verder kunnen zeldzame stammen van Staphylococcus aureus coagulase-negatief zijn, maar dierlijke isolaten (S. intermidius, S. hyicus, S. delphini en S. schleiferi subsp., coagulans) kan tube coagulase positief zijn ; differentiatie van deze vereist ook groei op MSA.
voorspellende waarden
groei op MSA had de hoogste negatieve voorspellende waarde (NPV) gevolgd door DNase, terwijl tube coagulase de laagste NPV had (die niet overeenkwam met de aanvankelijk waargenomen hoge gevoeligheid, zie Tabel 3). Omgekeerd gaven testcombinaties absolute NPV ‘ s (100%) met uitzondering van DNase/MSA (NPV van 92%), tabel 3., Uit de hoge NPV ‘ s van de testcombinaties, met name die met de TCT, blijkt dat testcombinaties betrouwbaar kunnen worden gebruikt bij routinematige identificatie van Staphylococcus aureus. DNase had de hoogste positieve voorspellende waarde (PPV), gevolgd door MSA (respectievelijk 96% en 83%). Omgekeerd resulteerde tube coagulase alleen in gemiddelde PPV ‘ s (54% en 50%), zie Tabel 3. Interessant is dat testcombinaties resulteerden in hoge PPV ‘s, waarbij DNase de hoogste PPV’ s had (95%), zie Tabel 3., Aldus, zoals voor NPV ‘ s, kan de specificiteit van TCT door een gelijktijdige identificatie van de isolaten met DNase en MSA worden verbeterd.
de ideale identificatie van klinische isolaten van Staphylococcus aureus vereist daarom een reeks tests. Staphylococcus aureus infecties komen vaker voor dan die door andere bacteriën, met name in settings met hoge hiv/AIDS prevalentie . Dit garandeert correcte identificatie van de isolaten om betere behandelingsresultaten te bereiken., Aangezien opties voor het verbeteren van de gevoeligheid en specificiteit worden gepresenteerd, zullen deze gegevens op de identificatie van Staphylococcal aureus in klinische specimens verbeteren.
aanbevelingen
voor routinematige identificatie van Staphylococcus aureus uit klinische specimens adviseren wij gelijktijdig gebruik van alle drie tests (te beginnen met groei op MSA, DNase en Tube coagulase) in omgevingen waar konijn-of paardenplasma ‘ s niet direct beschikbaar zijn., Screening van plasma ’s van andere soorten (zoals konijnen, geiten, varkens en runderen), die goedkoper en veiliger kunnen zijn en waarvan is gemeld dat ze efficiënter zijn dan menselijk plasma met TCT’ s, wordt aanbevolen. Bovendien wordt genotypering van klinische Staphylococcus isolaten aanbevolen om CoNS-isolaten te specialiseren en om de prevalentie van zeldzame Staphylococcus aureus en dierlijke isolaten in menselijke specimens in Oeganda te bepalen.