De antiglobuline-of Coombs-test maakt deel uit van de compatibiliteitstesten die elke patiënt die een rode bloedceltransfusie krijgt, moet ondergaan. Deze test is ook essentieel in het diagnostische werk van patiënten met bloedarmoede waarvan de oorsprong niet gemakkelijk wordt bepaald en wanneer de etiologie precies moet worden geïdentificeerd.in 1945 beschreven Robin Coombs, Arthur Mourant en Rob Race een test om anti-Rho (anti-D) niet-agglutinant antilichamen op te sporen.,1 oorspronkelijk werd de test bedacht door Robin Coombs als onderdeel van zijn postdoctorale studies aan Race and Mourant ‘ s laboratory in Cambridge, Engeland in 1945. Zijn doel was het bestuderen van de kenmerken van de antilichamen betrokken in de context van wat bekend stond als foetale erytroblastosis, die nu bekend staat als hemolytische ziekte van de pasgeborene (HDN), het vaakst veroorzaakt door de onverenigbaarheid tussen een Rh-negatieve moeder gesensibiliseerd tijdens een vorige zwangerschap, die IgG anti-D antilichamen in staat om de placenta barrière te passeren als gevolg van hun kleine omvang die dan betrekking hebben op de foetale rode bloedcellen., Deze zijn later fagocytosed in de milt en de lever, organen die, naast hun andere functies, extramedullaire hematopoiese in de foetus handhaven om voor bloedarmoede als gevolg van hemolyse te compenseren. Later, werd de Coombs-test gebruikt om de aanwezigheid van onvolledige antilichamen aan te tonen die de erytrocyten in vivo behandelden, zoals in gevallen van auto-immune hemolytic bloedarmoede (AHA) wordt gezien. De beschrijving van de methode, en de toepassing ervan in verschillende hematologische ziekten, werd gepubliceerd in The Lancet en de British Journal of Experimental Pathology in 1945 en 1946, respectievelijk.,2

de beginselen van de antiglobulinetest zijn als volgt: wanneer immunoglobulinen van de IgG-klasse (gamma-globuline) en het complement (bèta-globuline) van menselijke oorsprong bij verschillende konijnen worden geïnjecteerd, produceren zij IgG-antilichamen tegen deze globulinen, die later in het laboratorium worden gemengd om het breedspectrum-Coombs-reagens te produceren, dat in de dagelijkse praktijk van bloedbankieren wordt gebruikt., IgG-antiglobulinemoleculen van het konijn fungeren als een brug, die de onvolledige IgG-antilichamen verenigt die aangrenzende rode bloedcellen bedekken, waardoor agglutinatie en visualisatie van de reactie op het blote oog, die kan worden gezien in een reageerbuis of gelkaart, geïnterpreteerd als een positieve Coombs-test.

Er zijn twee varianten van deze test. Wanneer het wordt aangewend om antilichamen te ontdekken die aan erytrocyten in vivo worden gebonden is het bekend als een directe antiglobulinetest of directe Coombs-test., Aan de andere kant, wanneer de antiglobuline wordt gebruikt om de aanwezigheid in vitro van vrije antilichamen in serum na incubatie in de Coombs-fase van de cross match te detecteren, is het bekend als een indirecte antiglobulinetest, of een indirecte Coombs-test. Deze variant van de test wordt gebruikt voor de detectie van anti-D-antilichamen in het maternale serum van vrouwen die D-antigeen negatief zijn, alsook voor het zoeken naar en de identificatie van antilichamen in serum wanneer een panel van commerciële erytrocyten, waarvan het fenotype bekend is, wordt gebruikt.,3,4

applicaties de directe Coombs-test

• bij het onderzoek van antilichamen, zoals die bij patiënten met auto-immune hemolytische anemie.

• in het onderzoek van alloantilichamen, zoals bij pasgeborenen die hemolytische ziekte van de pasgeborene hebben.

• om een hemolytische transfusiereactie te documenteren.

de indirecte Coombs-test

• bij de detectie van onregelmatige antilichamen in het serum van de patiënt.

• bij de bepaling van fenotypen van rode bloedcellen.

• als onderdeel van de crossmatch-test.,

handmatige en automatische methoden voor de Coombs-test

deze kunnen in het algemeen worden overwogen: (1) traditionele en praktisch ongebruikte reageerbuistechnieken, (2) microplaattechnieken en (3) agglutinatietechnieken in gelkolommen. De vaste fasemethoden (gel, glaskralen en microplaten) verschenen in de jaren ‘ 90 en zijn sinds het jaar 2000 algemeen gebruikt in Mexico. Momenteel is de meest gebruikte techniek die van kaarten met gel kolommen.in 1990 ontwikkelde Lapierre een systeem van geltesten.,5 Deze waren gebaseerd op het gebruik van dextran acrylamide-geldeeltjes, een gelmatrix die als filter fungeerde, waardoor de verkleefde rode bloedcellen niet door de gel konden passeren en dus rode bloedcellen op het oppervlak van de gel werden gevangen op basis van hun grootte, wat een positieve test is. Een negatieve reactie vormt een knop van niet-agglutinated rode bloedcellen aan de onderkant van de microtube., De gelkaart bevat 6 microtubes, die voor de bepaling van 6 verschillende antigenen en antilichamen, gewoonlijk ABO bloedgroep (directe en omgekeerde) en relatieve vochtigheid (D-antigeen), verenigbaarheidstests, en Coombs-tests toestaat. Deze tests kunnen handmatig of automatisch worden uitgevoerd.,5

tot de voordelen van automatisering behoren de volgende: een groter aantal monsters kan worden geanalyseerd, gewassen erytrocyten zijn niet nodig, precisie en reproduceerbaarheid worden verbeterd, subjectiviteit in de interpretatie van de resultaten wordt geëlimineerd, de resultaten kunnen urenlang worden bewaard en handarbeid wordt verminderd, waardoor de kans op fouten in de verschillende fasen van de test tot een minimum wordt beperkt.

de directe Coombs-test

wanneer de directe antiglobulinetest positief is, betekent dit dat onvolledige IgG-antilichamen of fragmenten van het complement (met name C3d) aanwezig zijn op de erytrocyten., Aan de andere kant, wanneer er geen agglutinatie is (een negatieve test), zijn deze antilichamen niet aanwezig op het oppervlak van de erytrocyten (Fig. 1).6