Deze test toont de aanwezigheid aan van catalase, een enzym dat de afgifte van zuurstof uit waterstofperoxide (H2O2) katalyseert. Het wordt gebruikt om die bacteriën te onderscheiden die een enzym catalase, zoals stafylokokken produceren, van niet-catalase producerende bacteriën zoals streptokokken. Normaal gesproken wordt 3% H2O2 gebruikt voor de routine cultuur, terwijl 15% H2O2 wordt gebruikt voor de detectie van catalase in anaëroben.,
principe van de Catalasetest
het enzym catalase bemiddelt de afbraak van waterstofperoxide in zuurstof en water. De aanwezigheid van het enzym in een bacterieel isolaat is duidelijk wanneer een klein entmateriaal in waterstofperoxide wordt ingebracht en de snelle uitwerking van zuurstofbellen optreedt. Het gebrek aan catalase wordt duidelijk door een gebrek aan of zwakke bubble productie. De cultuur mag niet meer dan 24 uur oud zijn.,
bacteriën beschermen zich daardoor tegen het letale effect van waterstofperoxide, dat zich ophoopt als eindproduct van het aërobe koolhydraatmetabolisme.
doel of gebruik van de Catalasetest
- morfologisch vergelijkbare enterokokken of streptokokken (catalase-negatief) en Staphylococcus (catalase-positief) kunnen met de catalasetest worden onderscheiden.
- ook waardevol voor het differentiëren van aërobe en obligate anaerobe bacteriën.
- Semiquantatieve catalasetest wordt gebruikt voor de identificatie van Mycobacterium tuberculosis.,
- Het wordt gebruikt om aerotolerante stammen van Clostridium, die catalase-negatief zijn, te onderscheiden van Bacillus-soorten, die positief zijn.
- Catalasetest kan worden gebruikt als hulpmiddel bij de identificatie van Enterobacteriaceae.
procedure van de Catalasetest
- giet 1-2 ml waterstofperoxideoplossing in een reageerbuis.
- neem met een steriele houten stok of een glazen staaf verscheidene kolonies van het 18 tot 24 uur durende testorganisme en dompel in de waterstofperoxideoplossing.
- observeer voor onmiddellijk borrelen.,
Slide Method
- gebruik een lus of steriele houten stok om een kleine hoeveelheid koloniegroei over te brengen in het oppervlak van een schoon, droog glasplaatje.
- plaats een druppel van 3% H2O2 op het glasplaatje.
- observeer de evolutie van zuurstofbelletjes.
resultaat interpretatie van de Catalasetest en voorbeelden
positief: overvloedige bubbels geproduceerd, actieve bubbling
voorbeelden: stafylokokken, Microkokken, Listeria, Corynebacterium diphtheriae, Burkholderia cepacia, Nocardia, de familie Enterobacteriaceae (Citrobacter, E., coli, Enterobacter, Klebsiella, Shigella, Yersinia, Proteus, Salmonella, Serratia), Pseudomonas, Mycobacterium tuberculosis, Aspergillus, Cryptococcus, and Rhodococcus equi.
negatief: er worden geen of zeer weinig bubbels geproduceerd.
voorbeelden: Streptococcus en Enterococcus spp
kwaliteitscontrole van de Catalasetest
positief: Staphylococcus aureus– ATCC 33592
negatief: Enterococcus faecalis– ATCC 29212
voorzorgsmaatregelen bij de Catalasetest
- De testorganismen mogen niet uit de agarcultuur in het bloed worden genomen., Rode bloedcellen bevatten catalase en hun aanwezigheid zal een vals-positieve test geven.
- cultuur moet 18 tot 24 uur oud zijn.
- waterstofperoxide moet vers zijn omdat het zeer onstabiel is.
- de lus van ijzerdraad dient niet te worden gebruikt.
- sommige bacteriën produceren een peroxidase die een afbraak van waterstofperoxide katalyseert waardoor de reactie zwak positief is (een paar bubbels worden langzaam uitgewerkt). Dit moet niet worden verward met een werkelijk positieve reactie.
- voeg geen organisme toe aan het reagens, met name als ijzerhoudende inoculerende lussen worden gebruikt., Ijzer bevattende lussen zal vals positieve testresultaten veroorzaken indien blootgesteld aan waterstofperoxide.