oksidase testen påviser tilstedeværelse av en cytokrom oksidase system som vil catalyse transport av elektroner mellom electron givere i bakterier og et redox-dye – tetramethyl-p-phenylenediamine. Fargestoffet er redusert til dyp lilla farge., Denne testen brukes til å bistå med identifisering av Pseudomonas, Neisseria, Alcaligens, Aeromonas, Campylobacter, Vibrio, Brucella og Pasteurella, alle som produserer enzymet cytokrom oksidase.

En rekke reagenser kan brukes for denne testen.,

• Kovacs Oxidase Reagent:

1% tetra-methyl-p-phenylenediamine dihydrochloride, in water

• Gordon and McLeod’s Reagent:

1% dimethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride, in water

• Gaby and Hadley (indophenol oxidase) Reagent:

1% α-naphthol in 95% ethanol

1% p-aminodimethylaniline HCL

Principle of Oxidase Test

Cytochrome containing organisms produce an intracellular oxidase enzyme. This oxidase enzyme catalyzes the oxidation of cytochrome c., Organismer som inneholder cytokrom c som en del av deres luftveier kjeden er oksidase-positive og slå reagens blå/lilla. Organismer mangler cytokrom c som en del av deres luftveier kjede ikke oksidere reagens, og det er fargeløs innenfor grensene av testen, og er oksidase-negative.

Oksidase positive bakterier har cytokrom oksidase eller indophenol oxidase (et strykejern som inneholder haemoprotein). Begge disse catalyse transport av elektroner fra donor forbindelser (NADH) til elektronet akseptorer (vanligvis oksygen)., Testen reagens, N, N, N’, N’-tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride fungerer som en kunstig electron akseptor for enzymet oksidase. Den oksidert reagens danner farget sammensatte indophenol blå.

cytokrom system er vanligvis bare tilgjengelige i aerobe organismer som er i stand til å utnytte oksygen som den endelige hydrogen reseptor. Sluttproduktet av denne forbrenningen er enten vann eller hydrogen peroxide (brutt ned av catalase).

Formål/Bruker av Oksidase Test

• oksidase-test er brukt for å avgjøre om en organisme har cytokrom oksidase enzym.,
• testen brukes som et hjelpemiddel for differensiering av Neisseria, Moraxella, Campylobacter og Pasteurella arter (oksidase positiv).
• Det er også brukt til å skille pseudomonads fra beslektede arter.

Prosedyre for Oksidase Test

Det er mange metode i forhold til oksidase test. Disse inkluderer, men er ikke begrenset til, filter papir, test, direkte plate metode, vattpinneprøver metode, impregnert oksidase test strip metode og test-tube-metode. Alle tider, og konsentrasjonene er basert på de opprinnelige anbefalingene.,

Tørt Filter Papir Metode

Siden oksidase reagens er ustabilt og må være ferske for å bruke denne metoden er praktisk.

1. Stripe av Whatman Nr 1 filter papir er dynket i en nylaget 1% løsning av tertramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride.
2. Etter drenering i ca 30 sekunder, strimler er frysetørket og lagret i en mørk flaske tett forseglet med en skrukork.
3. For bruk, en stripe er fjernet, lagt i en petriskål og fuktet med destillert vann.,
4. kolonien som skal testes blir plukket opp med en platina-loop og smurt over fuktig område.
5. En positiv reaksjon er angitt med en intens, dyp lilla farge, vises innen 5-10 sekunder, som en «forsinket positive» reaksjon hos fargerike i 10-60 sekunder, og en negativ reaksjon ved fravær av fargerike eller av fargerike senere enn 60 sekunder.

Våt Filter Papir Metode

1. En stripe av filter papir fuktet med litt nystekte 1% løsning av reagensen.
2. En flekk av kultur er gnidd på det med en platina-løkke.,
3. En positiv reaksjon er angitt med en intens, dyp lilla farge, vises innen 5-10 sekunder, som en «forsinket positive» reaksjon hos fargerike i 10-60 sekunder, og en negativ reaksjon ved fravær av fargerike eller av fargerike senere enn 60 sekunder.

Direkte Plate Metode

– >

1. Legg til 2 -3 dråper av reagens direkte til mistenkelige kolonier på en agar plate. Ikke flom plate med reagens.
2. Observer for fargen skifter i løpet av 10 sekunder.

Merk: Direkte Plate metoden skal utføres på en ikke-selektiv agar plate.,

1. Når du bruker Kovac er oksidase reagens, mikroorganismer er oksidase positiv når fargen endres til en mørk lilla innen 5 til 10 sekunder. Mikroorganismer er forsinket oksidase positiv når den endres fargen til lilla innenfor 60 til 90 sekunder. Mikroorganismer er oksidase negativ hvis fargen ikke endre eller det tar lengre tid enn 2 minutter.
2. Ved hjelp av Gordon og McLeod-reagens, mikroorganismer er oksidase positiv når fargen endres til rødt innen 10 til 30 minutter, eller til svart innen 60 minutter. Mikroorganismer er oksidase negativ hvis fargen ikke endre.,

Vattpinneprøver Metode

1. Dypp pinnen i reagens og deretter trykker du på en isolert mistenker koloni
2. Observer for fargen skifter i løpet av 10 sekunder.

Test Tube Metode

– >

1. Vokse en frisk kultur (18 til 24 timer) av bakterier i 4.5 ml av næringsstoffer kjøttkraft (eller standard media som ikke inneholder en høy konsentrasjon av sukker).
2. Legg til 0,2 ml 1% α-naphthol, og deretter legge 0.3 ml 1% p-aminodimethylaniline oxalate (Gaby og Hadley reagenser).
3. Rist kraftig for å sikre miksing og grundig oksygenering av kultur.,
4. Observer for farge endringer.
5. Mikroorganismer er oksidase positiv når fargen endres til blå innen 15 til 30 sekunder. Mikroorganismer er forsinket oksidase positiv når den endres fargen til lilla i løpet av 2 til 3 minutter. Mikroorganismer er oksidase negativ hvis fargen ikke endre.

Resultat Tolkning av Oksidase Test

Positivt Resultat

Utvikling av en dyp lilla-blå/blå farge indikerer oksidase produksjon innen 5-10 sekunder.

Negativt Resultat

Ingen lilla-blå farge/Ingen farge endring.,

Examples

Oxidase Positive Organisms: Pseudomonas, Neisseria, Alcaligens, Aeromonas, Campylobacter, Vibrio, Brucella, Pasteurella, Moraxella, Helicobacter pylori, Legionella pneumophila, etc.

Oxidase Negative Organisms: Enterobacteriaceae (e.g. E., coli)

kvalitetskontroll for Oksidase Test

Positiv Kontroll: Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

Negativ Kontroll: Escherichia coli ATCC 25922

Begrensninger av Oksidase Test

– >

1. reagensene som brukes i oksidase test har vist seg å auto-oksiderer, så det er veldig viktig å bruke ferske reagenser, ikke eldre enn 1 uke.
2. Både bakterier og gjær dyrket på medier som inneholder høye konsentrasjoner av glukose vis hemmet oksidase aktivitet, så det er anbefalt å teste kolonier vokst på media uten mye sukker, som for eksempel nærings-agar., Tryptic soya agar er også en utmerket media.
3. Bakteriene som vokser på mediene som inneholder fargestoffer som kan gi avvikende resultater.
4. testen reagenser vil effektivt drepe mikroorganismer, så sub-kultur som bør gjøres før du legger til noen reagens til et aktivt kultur.
5. oksidase test kan brukes i den presumptive identifisering av Neisseria og i differensiering og identifisering av gram-negative staver. Oksidase-positive organismer bør undersøkes av gramfarging å finne ut morfologi og gram reaksjon., Flere biokjemiske tester er anbefalt for fullstendig identifikasjon.
6. Bruk av en nichrome eller andre strykejern inneholder loop kan gi falske positive reaksjoner. Platinum looper er anbefalt.
7. de Fleste Haemophilus er oksidase-positive. Mindre følsom strimler eller reagenser kan gi falskt negativt resultat.
8. Oksidase reaksjoner av gram-negative staver skal være fast bestemt på ikke-selektive og ikke-differensial media for å sikre at gyldige resultater. Også, kolonier, hentet fra medier som inneholder høye nivåer av glukose kan gi falskt negative reaksjoner.,
9. Det er anbefalt å bruke kolonier som er 18-24 timer gamle. Eldre kolonier vil gi svakere reaksjoner.
10. Alle farger endringer vises etter 20 sekunder bør strykes.