옥시 테스트 존재를 검출하고의 산화효소 시토크롬 시스템는 것을 촉진하기 위해 앞장서의 전송 전자 사이를 전자의 기부자들에 세균과 산화 염-테트라메틸-p-페닐렌디아민. 염료는 딥 퍼플 색상으로 감소됩니다., 이 테스트를 사용에 도움을 식별 슈도모나스균,Alcaligens,Aeromonas,캄필로박터,비브리오,Brucella 및 Pasteurella,의 모든 생성하는 효소 시토크롬 산화효소.

이 시험을 위해 다수의 시약을 사용할 수 있다.,

• Kovacs Oxidase Reagent:

1% tetra-methyl-p-phenylenediamine dihydrochloride, in water

• Gordon and McLeod’s Reagent:

1% dimethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride, in water

• Gaby and Hadley (indophenol oxidase) Reagent:

1% α-naphthol in 95% ethanol

1% p-aminodimethylaniline HCL

Principle of Oxidase Test

Cytochrome containing organisms produce an intracellular oxidase enzyme. This oxidase enzyme catalyzes the oxidation of cytochrome c., 그들의 호흡 사슬의 일부로 시토크롬 c 를 함유하는 유기체는 산화 효소 양성이며 시약을 청색/보라색으로 바꾼다. 생물 부족한 시토크롬 c 의 일부분으로 자신의 체인 호흡하지 않을 산화 시약을 떠나,그것은 무색의 한도 내에서 테스트하고,산화효소-부정적이다.

산화 효소 양성 박테리아는 시토크롬 산화 효소 또는 인도 페놀 산화 효소(헤모 단백질을 함유 한 철)를 보유합니다. 이들 모두는 공여체 화합물(NADH)에서 전자 수용체(일반적으로 산소)로의 전자 수송을 촉매한다., 테스트 시약,N,N,N’,N’-테트라메틸-p-페닐렌디아민 염산염 행위로 인공적인 전자의 수락자에 대한 효소화효소. 산화 된 시약은 착색 된 화합물 인 인도 페놀 블루를 형성합니다.

시토크롬 시스템은 일반적으로 현재에는 에어로빅 생물체의 가능한 활용하여 산소로는 최종 수소 적용할 수 있습니다. 이 신진 대사의 최종 생성물은 물 또는 과산화수소(카탈라아제에 의해 분해 됨)입니다.

목적/용도의 산화효소 테스트

• 의 산화효소 테스트를 결정하는데 사용하는 경우 유기체고 시토크롬 산화효소입니다.,
• 이 시험은 Neisseria,Moraxella,Campylobacter 및 Pasteurella 종(oxidase positive)의 분화 보조제로 사용됩니다.
• 또한 관련 종과 슈도모나드를 구별하는 데 사용됩니다.

산화 효소 시험의 절차

산화 효소 시험에 많은 방법 변이가 있습니다. 을 포함하되 이에 제한은 없지만,필터 종이 테스트,직접 판 방법,면봉법,임신 산화효소 테스트 스트립 방법 및 관 테스트 방법입니다. 모든 시간과 농도는 원래 권장 사항을 기반으로합니다.,

건조한 여과지 방법

이후로 산화효소 시약은 불안정하고 있는 것을 갓 준비 사용을 위한,이 방법이 편리합니다.

1. Whatman 의 No.1 여과지의 스트립을 테트라 메틸-p-페닐 렌-디아민 디 하이드로 클로라이드의 신선하게 준비된 1%용액에 담근다.
2. 약 30 초 동안 배수시킨 후,스트립을 동결 건조시키고 스크류 캡으로 단단히 밀봉 된 어두운 병에 보관한다.
3. 사용을 위해 스트립을 제거하고 페트리 접시에 놓고 증류수로 물기를 적셔줍니다.,
4. 테스트 할 콜로니는 백금 루프로 픽업되어 습한 부위에 번지게됩니다.
5. 긍정적인 반응에 의해 표시 강렬한 깊은 자주색 색상,나타나 5~10 초 이내에,”지연 긍정적이”반응하여 특색 10-60seconds,그리고 부정적인 반응에 의해 부재의 특색 또는 착색 60 초입니다.

젖은 여과지 방법

1. 스트립의 여과지 배어로 작은 갓 만든 1%솔루션약.
2. 문화의 얼룩은 백금 루프로 그 위에 문지릅니다.,
3. 긍정적인 반응에 의해 표시 강렬한 깊은 자주색 색상,나타나 5~10 초 이내에,”지연 긍정적이”반응하여 특색 10-60seconds,그리고 부정적인 반응에 의해 부재의 특색 또는 착색 60 초입니다.

직접 플레이트 방법

1. 한천 플레이트의 의심 콜로니에 2-3 방울의 시약을 직접 첨가하십시오. 시약으로 판을 범람시키지 마십시오.
2. 10 초 이내에 색상 변화를 관찰하십시오.

참고:직접 플레이트 방법은 비 선택적 한천 플레이트에서 수행되어야합니다.,

1. Kovac 의 산화 효소 시약을 사용할 때 미생물은 5~10 초 내에 색이 진한 보라색으로 변할 때 산화 효소 양성이다. 미생물은 60 초에서 90 초 이내에 색이 자주색으로 변할 때 지연 산화 효소 양성입니다. 미생물은 색이 변하지 않거나 2 분 이상 걸리는 경우 산화 효소 음성입니다.
2. Gordon 과 McLeod 시약을 사용할 때 미생물은 10 분에서 30 분 이내에 색이 적색으로 변하거나 60 분 이내에 검은 색으로 변할 때 산화 효소 양성이다. 미생물은 색이 변하지 않으면 산화 효소 음성입니다.,

봉 방법

1. Dip 봉으로 시약과 그 터치 절연 의심 식민지
2. 을 관찰한 색상 변경 내에서 10 초입니다.

관 테스트 방법

1. 성장하는 신선한 문화(18~24 시간)의 박테리아에서 4.5ml 의 영양 국물(표준 또는 미디어에 포함되지 않은 높은 농도의 설탕).
2. 0.2ml 의 1%α-나프톨을 첨가 한 다음 0.3ml 의 1%p-아미노 디메틸 아닐린 옥살산 염(Gaby 및 Hadley 시약)을 첨가하십시오.
3. 문화의 섞고는 그리고 철저한 산소화를 지키기 위하여 격렬하게 동요하십시오.,
4. 색상 변화에 대해 관찰하십시오.
5. 미생물은 15~30 초 내에 색이 청색으로 변할 때 산화 효소 양성이다. 미생물은 2~3 분 내에 색이 자주색으로 변할 때 지연 산화 효소 양성입니다. 미생물은 색이 변하지 않으면 산화 효소 음성입니다.

결과 해석의 산화효소 테스트

긍정적인 결과

개발의 깊은 자주색 파란색/파란 색깔을 나타냅 산화효소 5~10 초 이내에 생산.

부정적인 결과

보라색-파랑 색상 없음/색상 변경 없음.,

Examples

Oxidase Positive Organisms: Pseudomonas, Neisseria, Alcaligens, Aeromonas, Campylobacter, Vibrio, Brucella, Pasteurella, Moraxella, Helicobacter pylori, Legionella pneumophila, etc.

Oxidase Negative Organisms: Enterobacteriaceae (e.g. E., 대장균)

품질 제어에 대한 산화효소 테스트

긍정적인 제어:녹농균 ATCC27853

부정적인 제어:Escherichia coli ATCC25922

제한의 산화효소 테스트

1. 시약에 사용되는 산화효소 테스트에 표시 되었습 auto-산화,그래서 그것은 매우 사용하는 것이 중요 신선한 시약,아래보다 1 주일입니다.
2. 두 박테리아 및 효모에서 성장 미디어 포함하는 고농도의 포도당 쇼 억제 산화효소 활동이다,그래서 그것은을 테스트하는 것이 좋 식민지에서 재배되 미디어 초과하지 않고 설탕과 같은 영양소 agar., 삼중 간장 한천은 또한 훌륭한 매체입니다.
3. 염료가 함유 된 배지에서 성장한 박테리아는 비정상적인 결과를 줄 수 있습니다.
4. 테스트 시약을 효과적으로 죽이는 미생물,그래서 하 경작을 수행해야를 추가하기 전에 모든 시약을 활성화.
5. 산화 효소 시험은 Neisseria 의 추정 식별 및 그람 음성 간균의 분화 및 식별에 사용될 수 있습니다. 옥시 다제 양성 유기체는 형태학 및 그램 반응을 결정하기 위해 그램 얼룩에 의해 검사되어야한다., 완전한 식별을 위해 추가적인 생화학 검사가 권장됩니다.
6. 니크롬 또는 다른 철 함유 루프를 사용하면 위양성 반응을 얻을 수 있습니다. 백금 루프를 사용하는 것이 좋습니다.
7. 대부분의 헤모필루스는 산화 효소 양성이다. 덜 민감한 스트립이나 시약은 거짓 음성 결과를 얻을 수 있습니다.
8. 그람 음성 간균의 산화 효소 반응은 유효한 결과를 보장하기 위해 비 선택적 및 비 차등 매체에서 결정되어야한다. 또한 높은 수준의 포도당을 함유 한 배지에서 채취 한 콜로니는 거짓 음성 반응을 나타낼 수 있습니다.,
9. 18-24 시간 된 식민지를 사용하는 것이 좋습니다. 오래된 식민지는 더 약한 반응을 일으킬 것입니다.
10. 20 초 후에 나타나는 모든 색상 변화는 무시해야합니다.