Questo test dimostra la presenza di catalasi, un enzima che catalizza il rilascio di ossigeno dal perossido di idrogeno (H2O2). È usato per differenziare quei batteri che producono una catalasi enzimatica, come gli stafilococchi, da batteri che producono non catalasi come gli streptococchi. Normalmente il 3% H2O2 viene utilizzato per la coltura di routine mentre il 15% H2O2 viene utilizzato per il rilevamento della catalasi negli anaerobi.,

Principio del test della catalasi

L’enzima catalasi media la scomposizione del perossido di idrogeno in ossigeno e acqua. La presenza dell’enzima in un isolato batterico è evidente quando un piccolo inoculo viene introdotto nel perossido di idrogeno e si verifica la rapida elaborazione delle bolle di ossigeno. La mancanza di catalasi è evidente da una mancanza di o debole produzione di bolle. La cultura non dovrebbe avere più di 24 ore.,

I batteri si proteggono così dall’effetto letale del perossido di idrogeno che si accumula come prodotto finale del metabolismo aerobico dei carboidrati.

Scopo o usi del test catalasi

• Lo streptococco Enterococcus morfologicamente simile (catalasi negativo) e lo stafilococco (catalasi positivo) possono essere differenziati utilizzando il test catalasi.
• Utile anche per differenziare i batteri anaerobici aerobici e obbligati.
• Il test semiquantitativo della catalasi viene utilizzato per l’identificazione del Mycobacterium tuberculosis.,
• È usato per differenziare i ceppi aerotoleranti di Clostridium, che sono catalasi negativi, dalle specie di Bacillus, che sono positive.
• La prova della catalasi può essere usata come aiuto all’identificazione delle enterobacteriaceae.

Procedura del test di catalasi

1. Versare 1-2 ml di soluzione di perossido di idrogeno in una provetta.
2. Usando un bastoncino di legno sterile o una bacchetta di vetro, prendere diverse colonie dell’organismo di prova da 18 a 24 ore e immergere nella soluzione di perossido di idrogeno.
3. Osservare per bolle immediate.,

Metodo di scorrimento

1. Utilizzare un anello o un bastoncino di legno sterile per trasferire una piccola quantità di crescita della colonia sulla superficie di un vetrino pulito e asciutto.
2. Inserire una goccia di 3% H2O2 nel vetrino.
3. Osservare per l’evoluzione delle bolle di ossigeno.

Interpretazione dei risultati del test di catalasi ed esempi

Positivo: Bolle copiose prodotte, bolle attive

Esempi: Stafilococchi, Micrococci, Listeria, Corynebacterium diphtheriae, Burkholderia cepacia, Nocardia, la famiglia Enterobacteriaceae (Citrobacter, E., coli, Enterobacter, Klebsiella, Shigella, Yersinia, Proteus, Salmonella, Serratia), Pseudomonas, Mycobacterium tuberculosis, Aspergillus, Cryptococcus e Rhodococcus equi.

Negativo: Nessuna o pochissime bolle prodotte.

Esempi: Streptococcus e Enterococcus spp

Controllo di qualità del test catalasi

Positivo: Staphylococcus aureus-ATCC 33592

Negativo: Enterococcus faecalis-ATCC 29212

Precauzioni del test catalasi

• Gli organismi di prova non devono essere prelevati dalla coltura di agar nel sangue., I globuli rossi contengono catalasi e la loro presenza darà un test falso positivo.
• La cultura dovrebbe avere dalle 18 alle 24 ore.
• Il perossido di idrogeno deve essere fresco in quanto è molto instabile.
• Anello di filo di ferro non deve essere utilizzato.
• Alcuni batteri producono una perossidasi che catalizza una degradazione del perossido di idrogeno causando la reazione debolmente positiva; (alcune bolle elaborate lentamente). Questo non dovrebbe essere confuso con una reazione veramente positiva.
• Non aggiungere un organismo al reagente, in particolare se si utilizzano anelli di inoculazione contenenti ferro., I cicli contenenti ferro causeranno i risultati dei test falsi positivi se esposti al perossido di idrogeno.