L’antiglobulina, o test di Coombs, fa parte dei test di compatibilità che ogni paziente che riceverà una trasfusione di globuli rossi deve sottoporsi. Questo test è anche essenziale nel lavoro diagnostico di pazienti con anemia la cui origine non è facilmente determinata e quando l’eziologia deve essere identificata con precisione.

Nel 1945, Robin Coombs, Arthur Mourant e Rob Race descrissero un test per rilevare anticorpi non agglutinanti anti-Rho (anti-D).,1 Originariamente, il test è stato ideato da Robin Coombs come parte dei suoi studi post-laurea presso Race and Mourant’s laboratory a Cambridge, in Inghilterra nel 1945. Il suo obiettivo era quello di studiare le caratteristiche degli anticorpi coinvolti nel contesto di quello che era conosciuto come fetale erythroblastosis, che ora è conosciuto come malattia emolitica del neonato (MEN), causata più frequentemente da l’incompatibilità tra un Rh-negativo madre sensibilizzati durante una precedente gravidanza, che produce anticorpi IgG anti-D di anticorpi in grado di passare la barriera placenta a causa delle loro piccole dimensioni che poi coprire fetale globuli rossi., Questi sono successivamente fagocitati nella milza e nel fegato, organi che, oltre alle loro altre funzioni, mantengono l’emopoiesi extramidollare nel feto per compensare l’anemia derivante dall’emolisi. Successivamente, il test di Coombs è stato utilizzato per dimostrare la presenza di anticorpi incompleti che coprivano gli eritrociti in vivo, come si vede nei casi di anemia emolitica autoimmune (AHA). La descrizione del metodo e la sua applicazione in varie malattie ematologiche furono pubblicate sul Lancet e sul British Journal of Experimental Pathology nel 1945 e nel 1946, rispettivamente.,2

I principi del test antiglobulinico sono i seguenti: quando le immunoglobuline della classe IgG (gamma globulina) e il complemento (beta globulina) di origine umana vengono iniettati in diversi conigli, producono anticorpi IgG contro queste globuline, che vengono successivamente miscelati in laboratorio per produrre il reagente Coombs ad ampio spettro, che viene utilizzato nella pratica quotidiana del sangue., Le molecole di antiglobulina IgG del coniglio agiscono come un ponte, che unisce gli anticorpi IgG incompleti che coprono i globuli rossi adiacenti, causando agglutinazione e visualizzazione della reazione ad occhio nudo, che può essere vista in una provetta o carta gel, interpretata come un test di Coombs positivo.

Esistono due varianti di questo test. Quando viene impiegato per rilevare gli anticorpi legati agli eritrociti in vivo, è noto come test diretto antiglobulina o test diretto di Coombs., D’altra parte, quando l’antiglobulina viene utilizzata per rilevare la presenza in vitro di anticorpi liberi nel siero dopo l’incubazione nella fase di Coombs della partita incrociata, è noto come test antiglobulinico indiretto o test di Coombs indiretto. Questa variante del test è quella che viene utilizzata nella rilevazione di anticorpi anti-D nel siero materno di donne che sono antigene D negativo, così come la ricerca e l’identificazione di anticorpi nel siero quando viene impiegato un pannello di eritrociti commerciali, il cui fenotipo è noto.,3,4

Applicazioniil test diretto di Coombs

• Nello studio degli anticorpi, come quelli in pazienti con anemia emolitica autoimmune.

• Nello studio di alloanticorpi, come nei neonati affetti da malattia emolitica del neonato.

• Per documentare una reazione trasfusionale emolitica.

Il test indiretto di Coombs

• Nel rilevamento di anticorpi irregolari nel siero del paziente.

• Nella determinazione dei fenotipi dei globuli rossi.

• Come parte del test di crossmatch.,

Metodi manuali e automatici per il test di Coombs

Si possono considerare, in generale: (1) tecniche di provetta, che erano tradizionali e ora sono praticamente inutilizzate, (2) tecniche di micropiastre e (3) tecniche di agglutinazione in colonne di gel. I metodi di fase solida (gel, perle di vetro e micropiastre) sono apparsi negli anni ‘ 90 e hanno visto un uso generalizzato in Messico dall’anno 2000. Attualmente, la tecnica più utilizzata è quella delle carte con colonne di gel.

Il gel test

Nel 1990, Lapierre ha sviluppato un sistema di gel test.,5 Questi erano basati sull’uso di particelle di gel di destrano acrilammide, una matrice di gel che fungeva da filtro, impedendo il passaggio dei globuli rossi agglutinati e intrappolando così i globuli rossi sulla superficie del gel in base alle loro dimensioni, il che costituisce un test positivo. Una reazione negativa forma un pulsante di globuli rossi non agglutinati nella parte inferiore del microtubo., La scheda gel contiene 6 microtubi, che consente la determinazione di 6 diversi antigeni e anticorpi, di solito ABO gruppo sanguigno (diretto e inverso) e Rh (D-antigene), test di compatibilità e test di Coombs. Questi test possono essere eseguiti manualmente o automaticamente.,5

Tra i vantaggi dell’automazione sono i seguenti: un numero maggiore di campioni possono essere analizzati, lavato eritrociti non sono necessari, la precisione e la riproducibilità sono migliorate, la soggettività nell’interpretazione dei risultati è eliminato, i risultati possono essere conservati per ore, e il lavoro manuale è ridotto, riducendo la suscettibilità di errore nelle diverse fasi del test.

Il test diretto di Coombs

Quando il test diretto dell’antiglobulina è positivo, ciò significa che sugli eritrociti sono presenti anticorpi IgG incompleti o frammenti del complemento (in particolare C3d)., D’altra parte, quando non c’è agglutinazione (un test negativo), questi anticorpi non sono presenti sulla superficie degli eritrociti (Fig. 1).6