Koagulaasi-testaus on ainoa luotettava tapa tunnistaa Staphylococcus aureus. Koagulaasin tuotanto voidaan havaita joko liukukoagulaasitestillä (SCT) tai putkikoagulaasitestillä (TCT)., Dia-koagulaasi havaitsee sitoutuneen koagulaasin (jota kutsutaan myös ”clumping factoriksi”) , joka reagoi suoraan fibrinogeenin kanssa plasmassa aiheuttaen nopean solun agglutinaation. Negatiivinen eristää seuraavat SCT vaativat vahvistuksen, jossa on ylivoimainen TCT, koska kantoja puutteellinen paakkuuntuminen tekijä yleensä tuottaa ilmainen koagulaasi. Putki koagulaasi havaitsee erittyy solunulkoiseen ilmainen koagulaasi, joka reagoi aineen plasmassa nimeltään ”Koagulaasi-Reagoi Tekijä” (CRF) muodostaa kompleksin, joka puolestaan reagoi fibrinogeenin muodostaa fibriiniä (hyytymä) ., Koagulaasipositiivisten eläinten stafylokokkeja on eristetty ihmisen kliinisistä näytteistä, mutta jotkut eläinten stafylokokkisolaatit myös ferment mannitolia . Tutkimuksessa arvioitiin Tcts: n, Dnasen ja MSA: n suorituskykyä, fenotyyppisiä menetelmiä, joita käytetään yleisesti Staphylococcus aureuksen tunnistamisessa.

Havaitseminen Staphylococcus aureus käytettävissä fenotyyppiset testit

PCR-monistus ja nuc-geeni, jota käytettiin lähtötilanteessa testi, havainnut 32 Staphylococcus aureus 60 stafylokokki-isolaatit, ks.taulukko 2., 32 nuc-positiivinen Staphylococcus aureus-bakteerin isolaatit, MSA havaittu eniten isolaatit (30, 32, 94%), kun TCT (ihmisen ja lampaan plasma vastaavasti) osoittaa, 29 ja 27 32 isolaatit (91% ja 84%: lla), taulukko 2. Dnase havaitsi vähiten isolaatteja (24 / 32, 75%).

Yhdeksän 32 nuc-positiivinen Staphylococcus aureus-bakteerin isolaatit (28%) oli koagulaasi-negatiiviset, mikä tarkoittaa, että jotkut isolaatteja voi olla tunnistettu väärin jonka TCT ainoana testi. Koagulaasinegatiivinen Staphylococcus aureus voi todennäköisesti olla MRSA-isolaatteja , joiden kerrotaan reagoivan heikosti tai negatiivisesti TCTs: n tai harvinaisten Staphylococcus aureus-kantojen kanssa, joiden raportoidaan olevan koagulaasinegatiivisia . Kaksi Staphylococcus aureus-isolaattia (6%) olivat myös MSA-negatiivisia., Shittu et al raportoi myös mannitoli-negatiivisesta Staphylococcus aureuksesta, joka oli metisilliiniresistentti . Lisäksi kahdeksan 32: sta nuc-positiivisesta Staphylococcus aureus-isolaatista oli Dnaasinegatiivisia (25%). Rao et al raportoi dnase-negatiivisesta Staphylococcus aureuksesta, mutta ilman selitystä näille löydöksille . Kuusi stafylokokit muut kuin nuc-vahvisti Staphylococcus aureus-bakteerin isolaatit valmistettu keltainen pesäkkeiden MSA, ja vastaavia tuloksia on raportoitu muiden tutkijoiden . Toinen harvinainen havainto tässä tutkimuksessa oli isolaatti, joka oli DNaasi-positiivinen mutta MSA-negatiivinen ja putkikoagulaasi-negatiivinen (ts., ei-Staphylococcus aureus). Oletamme, että tämä isolaatti olisi voinut olla Staphylococcus schleiferi subsp. coagulans, joka kansallisen standardimenetelmän mukaan on myös dnase positiivinen .

Yksi fenotyyppiset testit ovat tehottomia tunnistamiseksi Staphylococcus aureus

käytimme herkkyys ja spesifisyys arvioida suorituskykyä yksittäisten testien havaitsemisessa Staphylococcus aureus., Kasvua MSA oli herkin (94% herkkyys), jonka jälkeen TCT (ihmisen ja lampaan plasma, 91% ja 81% herkkyys vastaavasti), kun taas DNase testi oli vähiten herkkä (75% herkkyys). Toisaalta, DNase-testi on tarkin (96% spesifisyys) ja sen jälkeen MSA (79% spesifisyys), kun TCT (ihmisen plasman ja lampaita plasma) oli vähintään tietty (11% ja 7%, vastaavasti), taulukko 3. Kaiken kaikkiaan yksittäisten testien tutkittu, kasvua MSA oli paras tunnistaa Staphylococcus aureus (94% herkkyys ja 79% spesifisyys)., Tuloksemme eroavat hieman Han et al: n tuloksista, jotka raportoivat MSA: n herkkyydestä 76,5% ja spesifisyydestä 99,6%. D ’ Souza et al, myös raportoitu herkkyys 71%, hieman pienempi kuin meidän . Korkea herkkyys MSA havaitsemisessa Staphylococcus aureus voi olla, koska sen kyky eristää patogeeninen Staphylococcus aureus, erottaa koagulaasi-negatiiviset stafylokokit alkaen koagulaasipositiivisia stafylokokkeja.,

tube koagulaasi, ihmisen plasmassa oli herkempi kuin lampaat plasma (91% vs. 81% herkkyys), mikä tarkoittaa, että käytät lampaita plasman kanssa TCTs havaita enemmän vääriä negatiivisia eristää. Näin ollen, tässä ympäristössä, se on epätodennäköistä, että lampaat plasma korvaa ihmisen plasman rutiini TCTs., Tietomme ovat yhtäpitäviä aiempien havaintojen kanssa, joissa 94-100 prosentin herkkyydestä kertoivat muut tutkijat . Kuitenkin tässä tutkimuksessa, herkkyyttä ihmisten ja lampaiden plasmassa oli suurempi kuin mitä oli ilmoitettu muut asetukset, jossa arvot niinkin alhainen kuin 54.5% (ihmisen plasmassa) ja 45,5 prosenttia (lammas plasma) raportoitiin . Siksi koagulaasitesteissä plasman suorituskyky vaihtelee asetuksella ja plasman valinta voi vaikuttaa testin tehokkuuteen. Myös EDTA: n tai sitraatin käyttö antikoagulanttina vaikuttaa testin suorituskykyyn., Huomionarvoista, sitraatti vaikuttaa vain koagulaasi reaktioita enterokokit, joissa sitä on hyödynnetty , mutta ei vaikuta koagulaasi tuottaa organismeja, kuten Staphylococcus aureus.

DNase testi oli herkkyys on 75% ja spesifisyys 96%, joka on verrattavissa muihin tutkimuksiin, joissa herkkyys on 75% ja spesifisyys 100% raportoitu . Tässä tutkimuksessa dnase-testi oli kaikista testeistä tarkin ja siinä oli vähiten vääriä positiivisia isolaatteja (vain yksi väärä positiivinen)., Tämä oli samaa mieltä muiden raporttien kanssa, joissa DNase-testin kerrottiin olevan TCT: tä parempi . Kasvua MSA oli myös erittäin spesifinen (79% spesifisyys), kun taas vähiten erityinen testi oli putki koagulaasi (ihmisen ja lampaan plasma, 11% ja 7% spesifisyys, vastaavasti).

sen sijaan muissa tutkimuksissa todettu korkea spesifisyys (93.6%) ihmisten ja lampaiden plasman kanssa TCTs ., Matala spesifisyys meidän tutkimus voi osittain johtua siitä, että ei havaitsemista muita koagulaasipositiivisia stafylokokkeja, kuten Staphylococcus schleiferi alalaji coagulans, Staphylococcus pöytä, Staphylococcus intermedius ja Staphylococcus hyicu s. Staphylococcus pöytä-ja Staphylococcus intermedius ovat harvinaisia kliinisiä isolaatteja, kun Staphylococcus hyicu s on määrittelemätön (joiden esiintyvyys vaihtelee 11%: sta 89% ). Näiden isolaattien esiintyvyys voi tietyissä tilanteissa olla suuri., Vaikka MSA ja DNase oli korkea erityispiirteet ja herkkyydet, kuten yksittäisiä testejä, niiden käyttö rutiini tunnistaminen Staphylococcus aureus on rajoitettu niiden kyky havaita muita bakteeri-isolaatteja , ja ovat enimmäkseen käytetään ensimmäisen näytöt . Todellakin, Mannitoli suolaa positiivinen Miinukset (Staphylococcus caprae, S. hemolyticus ja S. saprophyticus) on raportoitu Nigeria ja Japani ., Näin ollen tiettyjä asetuksia, jos käytetään yksilöllisesti tunnistamaan Staphylococcus aureus, yhteinen fenotyyppiset testit voivat olla riittämätön; jotkut isolaatit on tunnistettu väärin, joko Staphylococcus aureus tai Huonoja puolia.

yhdistelmä MSA ja DNase parantaa putken koagulaasi-testi

– Meidän on sitten arvioitava herkkyys ja spesifisyys testin yhdistelmiä (eli MSA/DNase/TCT) havaitsemaan Staphylococcus aureus, jonka tavoitteena on parantaa suorituskykyä TCT., Olemme saavuttaneet absoluuttisen spesifisyys (100%) havaitsemisessa Staphylococcus aureus testi yhdistelmiä, lukuun ottamatta DNase/MSA yhdistelmä (92% spesifisyys). Päinvastoin, herkkyys testi yhdistelmiä vaihteleva, MSA/DNase/TCT (human plasma) on herkin (75% herkkyys), kun taas MSA/DNase/TCT (lammas plasma) oli vähiten herkkä (25% herkkyys), taulukko 3.

yhdistelmä MSA/DNase johtanut herkkyys ja spesifisyys 92% ja 96%, vastaavasti, ja tämä olisi yhdistelmä valinta tunnistaminen Staphylococcus aureus., Koska molemmat testit eivät kuitenkaan ole spesifisiä Staphylococcus aureukselle ja ne voivat havaita muita bakteeri-isolaatteja, kaksoisyhdistelmää voidaan käyttää vain TCT: n parantamiseen. Vaikka muut testin yhdistelmiä-MSA/DNase/TCT (human plasma) ja MSA/TCT (human plasma) spesifisyys oli 100%, ne oli vaihteleva herkkyys (75% ja 33%, vastaavasti). Tämä linja, joka on yhdistelmä MSA/DNase/TCT (human plasma) on parempi tunnistaa Staphylococcus aureus (100% spesifisyys 75% herkkyys) kuin MSA/TCT (human plasma) yhdistelmä (100% spesifisyys, 33% herkkyys)., Samoin, DNase/TCT (lammas plasma) ja MSA/TCT (lammas plasma) ja MSA/DNase/TCT (lammas plasma) yhdistelmiä oli ehdoton erityisyys (100%), mutta vaihtelevalla herkkyys (50%, 25% ja 67%, vastaavasti).

näin putkikoagulaasin hyötysuhdetta voidaan parantaa samanaikaisella testauksella, johon kuuluvat sekä DNase että MSA. Suurempi herkkyys ja spesifisyys, jatko tunnistaminen Staphylococcus aureus voi aloittaa MSA, DNase-ja sitten TCT. Huomionarvoista on, että TCT: n parantunut spesifisyys ei merkittävästi muuttanut alun perin havaittua suurta herkkyyttä., Käyttö MSA ennen TCTs/DNase on erittäin suositeltavaa, koska paakkuuntuminen tekijä negatiivinen ja putki koagulaasipositiivisia stafylokokkeja, jotka ovat yhä enenevässä määrin toipunut ihmisen infektioita. Nämä isolaatit tuottavat myös lämpöstabiilin Dnaasin ja voidaan tunnistaa virheellisesti Staphylococcus aureukseksi. Kuitenkin, nämä kannat voidaan erottaa Staphylococcus aureus niiden epäonnistuminen tuottaa happoa maltoosi, laktoosi ja mannitoli. Lisäksi harvinaisia kantoja Staphylococcus aureus voi olla koagulaasi-negatiiviset , vielä eläin-isolaattien (S. intermidius, S. hyicus ja S. pöytä ja S. schleiferi subsp., koagulaanit) voivat olla putkikoagulaasipositiivisia ; niiden erilaistuminen vaatii myös kasvua MSA: ssa.

Ennustava arvoja

Kasvua MSA oli korkein negatiivinen ennustearvo (NPV), jonka jälkeen DNase, kun putki koagulaasi oli alhaisin NPV (joka ei vastaa korkea herkkyys aluksi havaittu, ks. taulukko 3). Toisaalta, testi yhdistelmiä antoi ehdoton Tulehduskipulääkkeet (100%) lukuun ottamatta DNase/MSA (NPV 92%), taulukko 3., Korkea Tulehduskipulääkkeet testin yhdistelmiä, erityisesti sellainen, johon liittyy TCT paljastaa, että testi yhdistelmiä voidaan luotettavasti käyttää rutiinia tunnistaminen Staphylococcus aureus. Dnasella oli suurin positiivinen ennustearvo (PPV), jota seurasi MSA (96% ja 83%). Vastaavasti pelkästään putkikoagulaasilla saatiin keskimääräiset PPV-arvot (54% ja 50%), ks.taulukko 3. Mielenkiintoista, testi yhdistelmiä johti korkea PPVs, jossa ne, joissa DNase ottaa korkein PPVs (95%), katso taulukko 3., Näin ollen TCT: n spesifisyyttä voidaan parantaa tunnistamalla isolaatit samanaikaisesti Dnasen ja MSA: n kanssa.

siksi Staphylococcus aureus-kliinisten isolaattien ihanteellinen tunnistaminen vaatii testipariston. Staphylococcus aureus-infektiot ovat yleisempiä kuin muiden bakteerien, erityisesti tilanteissa, joissa on korkea HIV/AIDS-esiintyvyys . Tämä edellyttää isolaattien oikeaa tunnistamista paremman hoitotuloksen saavuttamiseksi., Koska esitetään vaihtoehtoja herkkyyden ja spesifisyyden parantamiseksi, nämä tiedot parantavat stafylokokki aureuksen tunnistamista kliinisissä näytteissä.

Suositukset

rutiini tunnistaminen Staphylococcus aureus kliiniset näytteet, suosittelemme, samanaikainen käyttö kaikki kolme testiä (alkaen kasvu on MSA -, DNase-ja Putki koagulaasi) asetukset, jossa kani tai hevonen plasmat eivät ole helposti saatavilla., Seulonta plasmat muiden lajien (kuten kani, vuohi, sika ja nauta), joka voi olla halvempaa ja turvallisempaa, ja raportoitu olevan tehokkaampi kuin ihmisen plasman kanssa TCTs, on suositeltavaa. Lisäksi genotyypin määrittäminen kliinisen stafylokokki-isolaatit on suositeltavaa speciate Miinukset eristää ja määrittää esiintyvyys harvinainen Staphylococcus aureus ja eläinten eristää ihmisen yksilöitä Ugandassa.