mao-testi havaitsee läsnäolo sytokromioksidaasi-järjestelmä, joka on toimivat liikenne-elektronien välillä elektronin luovuttajien bakteerit ja redox-väriaine – tetrametyyli-p-fenyleenidiamiini. Väriaine pelkistyy syvän violetiksi väriksi., Tätä testiä käytetään auttaa tunnistamaan Pseudomonas, Neisseria, Alcaligens, Aeromonas, Kampylobakteeri -, Vibrio, Brucella ja Pasteurella, jotka kaikki tuottavat entsyymi sytokromi oksidaasin.

tässä testissä voidaan käyttää useita reagensseja.,

• Kovacs Oxidase Reagent:

1% tetra-methyl-p-phenylenediamine dihydrochloride, in water

• Gordon and McLeod’s Reagent:

1% dimethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride, in water

• Gaby and Hadley (indophenol oxidase) Reagent:

1% α-naphthol in 95% ethanol

1% p-aminodimethylaniline HCL

Principle of Oxidase Test

Cytochrome containing organisms produce an intracellular oxidase enzyme. This oxidase enzyme catalyzes the oxidation of cytochrome c., Organismeja, jotka sisältävät sytokromi c osana hengitysteiden ketju ovat oksidaasi-positiivisia ja käännä reagenssin sininen/violetti. Organismien puuttuu sytokromi c osana hengitysteiden ketju ei hapetu reagenssia, jolloin se väritön rajoissa testi, ja ovat oksidaasi-negatiivisia.

Hapetuspositiivisilla bakteereilla on sytokromioksidaasi tai indofenolioksidaasi (rautaa sisältävä hemoproteiini). Molemmat katalysoivat elektronien siirtymistä luovuttajayhdisteistä (NADH) elektronien vastaanottajiin (yleensä happi)., Testi reagenssi, N, N, N’, N’-tetrametyyli-p-fenyleenidiamiini annoksella toimii keinotekoinen electron tunnustaja entsyymin monoamiinioksidaasin. Hapettunut reagenssi muodostaa värillisen yhdisteen indofenolisinisen.

sytokromi järjestelmä on yleensä läsnä vain aerobisia organismeja, jotka pystyvät hyödyntää happea kuin lopullinen vety-reseptorin. Tämän metabolian lopputuote on joko vesi tai vetyperoksidi (katalaasin hajottamana).

Tarkoitus/Käyttää Mao-Testi

• mao-testiä käytetään määrittämään, jos organismi on sytokromioksidaasi-entsyymi.,
• testiä on käytetty apuna eriyttäminen Neisseria, Moraxella, Kampylobakteeri-ja Pasteurella-lajit (mao-positiivinen).
• Sitä käytetään myös erottamaan pseudomonads sukulaislajeja.

Menettely Mao-Testi

On olemassa monia menetelmä muutosten mao-testi. Näitä ovat, mutta eivät rajoitu, suodatin paperi testi, suora levy menetelmä, moppi menetelmä, kyllästetty mao-testi nauhat menetelmä ja testi putki menetelmällä. Kaikki ajat ja pitoisuudet perustuvat alkuperäisiin suosituksiin.,

Kuiva Suodatin Paperi-Menetelmä

Koska mao-reagenssi on epävakaa ja se on valmistettava juuri ennen käyttöä, tämä menetelmä on kätevä.

1. Whatmanin No. 1-suodatinpaperin kaistaleet liotetaan vasta valmistetussa 1-prosenttisessa tertrametyyli-p-fenyleenidiamiinidihydrokloridiliuoksessa.
2. tyhjennyksen Jälkeen noin 30 sekuntia, nauhat ovat jäädyttää kuivataan ja varastoidaan pimeässä pullo tiiviisti suljetuissa kierrekorkki.
3. käyttöä varten poistetaan liuska, asetetaan petrimaljaan ja kostutetaan tislatulla vedellä.,
4. testattava siirtokunta poimitaan platinasilmukalla ja tuhritaan kostean alueen päälle.
5. positiivinen reaktio on merkitty voimakas syvä-violetti sävy, esiintyy 5-10 sekuntia, ”myöhässä positiivinen” reaktio, jonka väritys 10-60 sekuntia, ja negatiivinen reaktio, jonka puuttuminen väritys tai väri myöhemmin kuin 60 sekuntia.

Märkä Suodatin Paperi-Menetelmä

1. kaistale suodatinpaperin on liottaa kanssa vähän tuoreita 1% liuos reagenssia.
2. siihen hierotaan platinasilmukalla kulttuurin pilkettä.,
3. positiivinen reaktio on merkitty voimakas syvä-violetti sävy, esiintyy 5-10 sekuntia, ”myöhässä positiivinen” reaktio, jonka väritys 10-60 sekuntia, ja negatiivinen reaktio, jonka puuttuminen väritys tai väri myöhemmin kuin 60 sekuntia.

Suora Levy Menetelmä

1. Lisätä 2 -3 tippaa reagenssia suoraan epäillä pesäkkeiden agar levy. Älä täytä levyä reagenssilla.
2. tarkkaile värin muutosta 10 sekunnin kuluessa.

huomaa: suora Levymenetelmä on tehtävä ei-selektiivisellä agaarilevyllä.,

1. Kun käytät Kovac on mao-reagenssi, mikro-organismit ovat oksidaasi + kun väri muuttuu tumman violetti 5-10 sekuntia. Mikro-organismit viivästyvät hapetuspositiivisesti, kun väri muuttuu violetiksi 60-90 sekunnissa. Mikro-organismit ovat oksidaasinegatiivisia, jos väri ei muutu tai se kestää yli 2 minuuttia.
2. Kun käytät Gordon ja McLeod reagenssi, mikro-organismit ovat oksidaasi + kun väri muuttuu punaiseksi 10-30 minuuttia tai musta 60 minuutin kuluessa. Mikro-organismit ovat oksidaasinegatiivisia, jos väri ei muutu.,

Moppi Menetelmä

1. Kasta moppi osaksi reagenssin ja kosketa sitten yksittäinen epäilty siirtomaa
2. Huomioi värin muutos 10 sekunnin kuluessa.

koeputkeen Menetelmä

1. Kasvaa tuoretta kulttuuria (18-24 tuntia) bakteerien 4.5 ml ravinteiden liemi (tai standardin median, joka ei sisällä runsaasti sokeria).
2. Lisätä 0,2 ml 1% α-naftoli, sitten lisää 0,3 ml 1% p-aminodimethylaniline oksalaatti (Gaby ja Hadley reagenssit).
3. ravista voimakkaasti sekoittumisen ja viljelmän perusteellisen hapetuksen varmistamiseksi.,
4. tarkkaile värimuutoksia.
5. mikro-organismit ovat hapetuspositiivisia, kun väri muuttuu siniseksi 15-30 sekunnissa. Mikro-organismit viivästyvät hapetuspositiivisesti, kun väri muuttuu violetiksi 2-3 minuutin kuluessa. Mikro-organismit ovat oksidaasinegatiivisia, jos väri ei muutu.

Tuloksen Tulkinta Mao-Testi

Positiivinen Tulos,

Kehittäminen deep purple-sininen/sininen väri ilmaisee, mao-tuotanto 5-10 sekuntia.

Negatiivinen Tulos

Ei violetti-sininen väri/Ilman väri muuttuu.,

Examples

Oxidase Positive Organisms: Pseudomonas, Neisseria, Alcaligens, Aeromonas, Campylobacter, Vibrio, Brucella, Pasteurella, Moraxella, Helicobacter pylori, Legionella pneumophila, etc.

Oxidase Negative Organisms: Enterobacteriaceae (e.g. E., coli)

laadunvalvontaa Mao-Testi

Positiivinen Kontrolli: Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853

Negatiivinen Kontrolli: Escherichia coli ATCC 25922

Rajoitukset Mao-Testi

1. reagenssit, joita käytetään mao-testi on osoitettu auto-hapettua, joten se on erittäin tärkeää käyttää tuoreita reagenssit, ei vanhempi kuin 1 viikko.
2. Sekä bakteerit ja hiiva kasvanut media, joka sisältää suuria pitoisuuksia glukoosi-esityksessä estää mao-toimintaa, joten on suositeltavaa testata siirtomaita kasvanut media ilman liikaa sokeria, kuten ravinteiden agar., Tryptic soy agar on myös erinomainen media.
3. väriaineita sisältävillä väliaineilla kasvatetut bakteerit voivat antaa poikkeavia tuloksia.
4. testireagenssit tappavat mikro-organismit tehokkaasti, joten alikulutus on tehtävä ennen reagenssin lisäämistä aktiiviseen viljelyyn.
5. mao-testiä voidaan käyttää oletetun tunnistaminen ja Neisseria eriyttäminen ja tunnistaminen gram-negatiivisia basilleja. Oksidaasi-positiiviset organismit on tutkittava grammatahralla morfologian ja gram-reaktion määrittämiseksi., Täydellistä tunnistamista varten suositellaan muita biokemiallisia testejä.
6. nichromen tai muun rautaa sisältävän silmukan käyttö voi aiheuttaa vääriä positiivisia reaktioita. Platinalenkkejä suositellaan.
7. useimmat Haemophilus-tabletit ovat oksidaasipositiivisia. Vähemmän herkät kaistaleet tai reagenssit voivat tuottaa vääriä negatiivisia tuloksia.
8. Oksidaasi reaktioita gram-negatiivisia basilleja olisi määritettävä ei-selektiivisiin ja ei-differential media luotettavien tulosten varmistamiseksi. Myös suuria glukoosipitoisuuksia sisältävistä väliaineista otetut pesäkkeet voivat aiheuttaa vääriä negatiivisia reaktioita.,
9. on suositeltavaa käyttää 18-24 tuntia vanhoja pesäkkeitä. Vanhemmat pesäkkeet tuottavat heikompia reaktioita.
10. kaikki 20 sekunnin kuluttua esiintyvät värimuutokset tulee jättää huomioimatta.