antiglobulinový, nebo Coombsův test je součástí zkoušky slučitelnosti, že každý pacient, který obdrží transfúzi červených krvinek musí podstoupit. Tento test je také nezbytný v diagnostické práci pacientů s anémií, jejichž původ není snadno určen a kdy musí být etiologie přesně identifikována.

v roce 1945 Robin Coombs, Arthur Mourant a Rob Race popsali test na detekci anti-Rho (anti-D) neaglutinantních protilátek.,1 původně byl test navržen Robinem Coombsem v rámci jeho postgraduálního studia na Race and Mourant ‚ s laboratory v Cambridge v Anglii v roce 1945. Jeho cílem bylo studovat vlastnosti protilátek zapojených v kontextu toho, co bylo známé jako fetální erythroblastosis, který je nyní známý jako hemolytické onemocnění novorozence (HON), způsobené nejčastěji o neslučitelnosti Rh-negativní matka citlivé průběhu předchozího těhotenství, který produkuje IgG anti-D protilátky moci projít placentární bariérou vzhledem k jejich malé velikosti, které pak pokrývají fetální červené krvinky., Tyto jsou následně fagocytovány ve slezině a játrech, orgánů, které, kromě svých dalších funkcí, udržení extramedulární krvetvorby u plodu ke kompenzaci anémie vyplývající z hemolýzy. Později byl test Coombs použit k prokázání přítomnosti neúplných protilátek, které pokryly erytrocyty in vivo, jako je tomu v případech autoimunitní hemolytické anémie (AHA). Popis metody a její aplikace v různých hematologických onemocněních byl publikován v lancetu a British Journal of Experimental Pathology v letech 1945 a 1946.,2

zásady antiglobulinový test, jsou následující: když imunoglobulinů třídy IgG (gamma globulin) a doplněk (beta globulin) lidského původu, které se vstřikuje do různých králíků, které produkují IgG protilátky proti těmto globuliny, které jsou následně smíchány v laboratoři k výrobě širokého spektra Coombs činidlo, které se používá v každodenním krve bankovnictví praxe., Králičí IgG antiglobulinový molekuly působit jako most, který spojuje neúplné IgG protilátky krytiny přilehlých červených krvinek, což způsobuje aglutinaci a vizualizaci reakce pouhým okem, který může být viděn ve zkumavce nebo gel karty, interpretován jako pozitivní Coombsův test.

existují dvě varianty tohoto testu. Pokud se používá k detekci protilátek vázaných na erytrocyty in vivo, je znám jako přímý antiglobulinový test nebo přímý Coombsův test., Na druhou stranu, když antiglobulinový se používá k detekci přítomnosti in vitro volných protilátek v séru po inkubaci v Coombsův fáze cross match, to je známé jako nepřímý antiglobulinový test, nebo nepřímý Coombsův test. Tato varianta testu je ten, který je použit v detekci anti-D protilátek v mateřském séru žen, které jsou D antigen negativní, stejně jako hledání a identifikaci protilátek v séru když panel komerční erytrocyty, jejichž fenotyp je známo, je zaměstnán.,3,4

Aplikacepřímý test Coombs

• při vyšetřování protilátek, jako jsou pacienti s autoimunitní hemolytickou anémií.

• při vyšetřování alloantibodies, jako například u novorozenců trpících hemolytickým onemocněním novorozence.

• pro dokumentování hemolytické transfuzní reakce.

nepřímý Coombsův test

• při detekci nepravidelných protilátek v séru pacienta.

• při stanovení fenotypů červených krvinek.

• jako součást testu crossmatch.,

Manuální a automatické metody pro Coombsův test

Tyto mohou být považovány za obecně: (1) zkumavky techniky, které jsou tradiční a jsou nyní prakticky nepoužitý, (2) na mikrotitrační destičce techniky, a (3) aglutinační techniky v gelu sloupce. Metody pevné fáze (gel, skleněné korálky a mikroplaty) se objevily v 90.letech a od roku 2000 zaznamenaly zobecněné použití v Mexiku. V současné době je nejpoužívanější technikou karty s gelovými sloupy.

gelový test

v roce 1990 vyvinul Lapierre systém gelových testů.,5 Tyto byly založeny na použití dextran akrylamidu částic gelu, gel matrix, který působil jako filtr, zastavení slepených červených krvinek z průchodu a tak chytat červených krvinek na povrchu gelu v závislosti na jejich velikosti, která představuje pozitivní test. Negativní reakce tvoří tlačítko neaglutinovaných červených krvinek ve spodní části mikrotube., Gel karta obsahuje 6 mikrozkumavek, které umožňuje stanovení 6 různých antigenů a protilátek, obvykle ABO krevní typ (přímá a inverzní) a Rh (D-antigen), testy kompatibility, a Coombs testy. Tyto testy lze provádět ručně nebo automaticky.,5

Mezi výhody automatizace jsou následující: větší počet vzorků, které lze analyzovat, promývá erytrocyty nejsou nutné, přesnost a reprodukovatelnost je lepší, subjektivita v interpretaci výsledků je odstraněna, výsledky mohou být zachovány pro hodiny, a manuální práce je snížena, čímž se minimalizuje náchylnost na chyby v jednotlivých fázích testu.

přímý test Coombs

pokud je přímý antiglobulinový test pozitivní, znamená to, že na erytrocytech jsou přítomny neúplné IgG protilátky nebo fragmenty komplementu (konkrétně C3d)., Na druhé straně, pokud neexistuje aglutinace (negativní test), tyto protilátky nejsou přítomny na povrchu erytrocytů (obr. 1).6.

negativní přímý Coombsův test, nutně neznamená, že tam nejsou žádné nekompletních protilátek na červené krvinky, protože obvyklá činidla pro lidská polyspecific antiglobulins, které jsou používány denně v krevní banky, pouze reagují, když tam jsou alespoň 200 IgG molekuly nebo více za erytrocytů. Stejným způsobem, pokud protilátka zapojeni je IgA, stejně jako v některých případech, autoimunitní hemolytická anémie, test bude negativní, protože standardní Coombs reagencie neobsahuje anti-IgA protilátek.,7,8

nepřímý Coombsův test

nepřímé lidské antiglobulinový test je pozitivní, když tam jsou zdarma IgG protilátky v séru, jako je tomu v případě hemolytické nemoci novorozenců, test je také běžně používá pro identifikaci nelegálních (nečekané) protilátky zaměstnávání komerční panelu červených krvinek (Obr. 1).,6.

Na závěr, od svého zavedení do klinické laboratoře před 70 lety, Coombsův test vyvinul technicky, a jeho zásady nadále platí dnes, což dělá tento jednoduchý a ekonomický test, jeden z nejvíce univerzální a důležité používá v diagnostice hematologických onemocnění, a v bezpečí praxi transfuzního lékařství.

financování

nebyla poskytnuta žádná finanční podpora.

Střet zájmů

autoři nemají žádné střety zájmu.