počítání buněk s Hemocytometrem

hemocytometr je rozdělen na 9 hlavních čtverců o velikosti 1 mm x 1 mm. Čtyři kuželové čtverce (identifikované červeným čtvercem) jsou dále rozděleny na 4 x 4 mřížky. Výška Komory vytvořené krycím sklem je 0,1 mm, takže komora 1 mm x 1 mm x 0,1 mm má objem 0,1 mm3 nebo 10-4 ml.

Chcete-li počítat buňky pomocí hemocytometru, přidejte 15-20µl buněčné suspenze mezi hemocytometr a krycí sklo pomocí Pipetmana P-20., Cílem je mít zhruba 100-200 buněk / čtverec. Spočítejte počet buněk ve všech čtyřech vnějších čtvercích dělených čtyřmi (průměrný počet buněk / čtverců). Počet buněk na čtverec x 104 = počet buněk / ml suspenze. Tento protokol funguje dobře buď pro adherentní savčí buňky, které byly trypsinizovány, nebo pro suspenzní buňky včetně SF9 hmyzích buněk. Červené krvinky jsou obvykle příliš malé a četné pro tento protokol a místo toho využívají střední čtverec.

po dokončení postříkejte hemocytometr a zakryjte skluzu 70% ethanolem, abyste zabili buňky., Omyjte oba deionizovanou vodou a osušte ji Kimwipe. Zabalte do čisté Kimwipe a vraťte se do úložného boxu. Všimněte si, že krycí pásky pro hemocytomer jsou vyrobeny ze speciálního silnějšího/ploššího skla. Snažte se, aby nedošlo k jeho lámání nebo ztrátě. Pokud tak učiníte, Změna pořadí hemocytomer kryt klouže, ne pravidelné krycí pásky.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna. Vyžadované informace jsou označeny *