Koaguláza testování je jeden z nejvíce spolehlivé metody pro identifikaci Staphylococcus aureus. Koaguláza výroby mohou být detekovány buď pomocí slide koaguláza test (SCT) nebo trubice koaguláza test (TCT)., Snímek koaguláza detekuje vázaná koaguláza (také volal „clumping factor“) , který reaguje přímo s fibrinogenu v plazmě, což způsobuje rychlé mobilní aglutinace. Negativní izolátů následující SCT vyžadovat potvrzení s vynikající TCT, protože kmeny deficientní v clumping faktor obvykle produkují zdarma koaguláza. Trubice koaguláza detekuje vylučován extracelulární zdarma koaguláza, který reaguje s látkou v plazmě tzv. „Koaguláza-Reaguje Faktor“ (CRF) tvoří komplex, který zase reaguje s fibrinogenu tvoří fibrin (srážení) ., Kmeny koaguláza-pozitivní-zvíře stafylokoky byly izolovány z lidských klinických vzorků, přesto některé zvíře stafylokokových izolátů také kvasit mannitol . Tato studie hodnotila výkon TCTs, Dnázy a MSA, fenotypové metody běžně používané při identifikaci Staphylococcus aureus.

Detekce Staphylococcus aureus s dostupnými fenotypové testy

PCR-amplifikace nuc gen, který byl použit jako základní test, zjistil 32 Staphylococcus aureus 60 stafylokokových izolátů, viz tabulka 2., 32 nuc-pozitivní Staphylococcus aureus izolátů, MSA zjištěn nejvyšší počet izolátů (30, 32, 94%), zatímco TCT (lidské a ovčí plazmě respektive) zjištěna 29 a 27 z 32 izolátů (91% a 84% respektive), tabulka 2. DNase detekovala nejmenší počet izolátů (24 z 32, 75%).

Devět z 32 nuc-pozitivní Staphylococcus aureus izolátů (28%) byly koaguláza negativní, což znamená, že některé izoláty mohou být chybně podle TCT jako jediný test. Na koaguláza negativní Staphylococcus aureus může být pravděpodobně MRSA izolátů, které jsou hlášeny reagují slabě nebo negativně s TCTs , nebo vzácné Staphylococcus aureus kmeny, které jsou hlášeny být koaguláza negativní . Dva izoláty Staphylococcus aureus (6%) byly také MSA negativní., Shittu et al také hlásil mannitol negativní Staphylococcus aureus, který byl rezistentní na meticilin . Kromě toho bylo osm z 32 NUC-pozitivních izolátů Staphylococcus aureus DNase negativní (25%). Rao et al hlášeny DNase negativní Staphylococcus aureus, ale bez vysvětlení těchto zjištění . Šest stafylokoků jiných než izoláty nuc potvrzené Staphylococcus aureus produkovalo žluté kolonie na MSA a podobné nálezy byly hlášeny jinými vyšetřovateli . Dalším vzácným nálezem v této studii byl izolát, který byl pozitivní na Dnázu, ale MSA-negativní a koaguláza zkumavky-negativní (tj., non-Staphylococcus aureus). Předpokládáme, že tento izolát mohl být Staphylococcus schleiferi subsp. koagulany, které jsou podle národní standardní metody také pozitivní na Dnázu .

jednotlivé fenotypové testy jsou neúčinné pro identifikaci Staphylococcus aureus

použili jsme citlivost a specificitu k vyhodnocení výkonu jednotlivých testů při detekci Staphylococcus aureus., Růst na MSA byl nejcitlivější (citlivost 94%), následovaný TCT (plazma člověka a ovcí, citlivost 91% a citlivost 81%), zatímco test DNase byl nejméně citlivý (citlivost 75%). Naopak, Dnázový test byl nejvíce specifický (96% specificita) následovaný MSA (79% specificita), zatímco TCT (lidská plazma a ovčí plazma) byla nejméně specifická (11% a 7%), tabulka 3. Celkově z jednotlivých studovaných testů byl růst na MSA nejlepší při identifikaci Staphylococcus aureus (94% citlivost a 79% specificita)., Naše výsledky se mírně liší od těch, Han et al, kteří uvádějí, citlivost a specifičnost 76,5% a 99.6%, respektive, pro MSA . D ‚ Souza et al, také hlášeny citlivost 71%, o něco nižší než naše . Vysoká citlivost MSA v detekci Staphylococcus aureus může být vzhledem k jeho schopnost izolovat patogenní Staphylococcus aureus, rozlišování koaguláza negativní stafylokoky od koaguláza pozitivní stafylokoky.,

Pro trubky koaguláza, lidské plazmy byla citlivější než ovčí plazmě (91% vs. 81% citlivost), což znamená, že pomocí ovčí plazmy s TCTs může detekovat více falešně negativních izolátů. V tomto nastavení je tedy nepravděpodobné, že by plazma ovcí nahradila lidskou plazmu za rutinní TCT., Naše data jsou v souladu s předchozími zjištěními, ve kterých byla citlivost 94-100% hlášena jinými vyšetřovateli . Nicméně, v této studii, citlivosti pro lidské a ovčí plazmě byla vyšší, než jak uvádí další nastavení, kde se hodnoty tak nízké, jak je 54.5% (lidské plazmě) a 45,5% (ovčí plazmy) byly hlášeny . Proto při koagulázových testech se plazmatický výkon mění s nastavením a volba plazmy může ovlivnit účinnost testu. Také použití EDTA nebo citrátu jako antikoagulantu ovlivňuje výkon testu., Pozoruhodné, citrát ovlivňuje pouze koaguláza reakce enterokoky, kde je využívána , ale nemá vliv na koaguláza produkující mikroorganismy, jako jsou Staphylococcus aureus.

test Dnázy měl senzitivitu 75% a specificitu 96%, což je srovnatelné s jinými studiemi, které citlivostí 75% a specifičnost 100% byly hlášeny . V této studii byl test DNase nejkonkrétnější ze všech testů a měl nejmenší počet falešně pozitivních izolátů (byl pouze jeden falešně pozitivní)., To bylo v souladu s dalšími zprávami, ve kterých byl test DNase hlášen jako lepší než TCT . Růst na MSA byl také vysoce specifický (79% specificita), zatímco nejméně specifickým testem byla koaguláza zkumavky (lidská a ovčí plazma, 11% a 7% specificita).

naproti tomu jiné studie uváděly vysokou specificitu (93, 6%) pro plazmu člověka a ovcí s TCT ., Nízká specificita v naší studii může být částečně způsobeno nespecifické detekce ostatních koaguláza pozitivních stafylokoků, jako je Staphylococcus schleiferi poddruh coagulans, Staphylococcus delphini, Staphylococcus intermedius a Staphylococcus hyicu s. Staphylococcus delphini a Staphylococcus intermedius jsou vzácné klinických izolátů, zatímco Staphylococcus hyicu s je neurčitý (s prevalencí v rozmezí od 11% do 89% ). Prevalence těchto izolátů může být v určitých nastaveních vysoká., I když MSA a Dnázy měl vysoké specifičnosti a citlivosti, jak jednotlivé testy, jejich využití v rutinní identifikaci Staphylococcus aureus je omezována jejich schopnost detekovat jiných bakteriálních izolátů , a jsou většinou použity během počáteční obrazovky . Opravdu, Mannitol salt pozitivní CoNS (Staphylococcus caprae, S. hemolyticus a. S. saprophyticus) byly zaznamenány v Nigérii a Japonsko ., Tak, v některých nastavení, pokud se používá samostatně k identifikaci Staphylococcus aureus, společné fenotypové testy mohou být nedostatečné; některé izoláty bude chybně, buď jako Staphylococcus aureus nebo Nevýhody.

kombinace MSA a Dnázy zlepšuje trubice koaguláza test

pak Jsme hodnotili citlivost a specifičnost testu kombinací (tj MSA/Dnázy/TCT) na detekci Staphylococcus aureus, jehož cílem je zlepšit výkon TCT., Absolutní specifičnost (100%) jsme dosáhli při detekci Staphylococcus aureus pomocí testovacích kombinací, s výjimkou kombinace DNase / MSA (92% specificita). Naopak, citlivost testu kombinace pestrá, s MSA/Dnázy/TCT (lidské plazmě) je nejvíce citlivý (75% citlivosti), zatímco MSA/Dnázy/TCT (ovce plazma) byl nejméně citlivý (25% citlivost), tabulka 3.

kombinace MSA / Dnázy vedla ke specificitě a citlivosti 92% a 96%, což by byla kombinace volby pro identifikaci Staphylococcus aureus., Protože však oba testy nejsou specifické pro Staphylococcus aureus a mohou detekovat jiné bakteriální izoláty, lze duální kombinaci použít pouze ke zlepšení TCT. Ačkoli jiné kombinace testů-MSA/DNase/TCT (lidská plazma) a MSA/TCT (lidská plazma) měly specificitu 100%, měly různou citlivost (75% a 33%). V tomto řádku, kombinace MSA/Dnázy/TCT (lidské plazmě) je lepší na identifikaci Staphylococcus aureus (100% specificitu 75% citlivosti), než MSA/TCT (lidské plazmě), kombinace (100% specifičnost, 33% citlivost)., Podobně, Dnázy/TCT (ovce plazmě) a MSA/TCT (ovce plazmě) a MSA/Dnázy/TCT (ovce plazma) kombinace měla absolutní specificita (100%), ale s různou citlivost (50%, 25% a 67%, respektive).

účinnost koagulázy trubice tak může být zlepšena současným testováním, které zahrnuje jak Dnázu, tak MSA. Pro vyšší citlivost a specifičnost může pokračovat identifikace Staphylococcus aureus s MSA, DNase a pak TCT. Za zmínku stojí, že zlepšená specificita TCT významně nezměnila původně pozorovanou vysokou citlivost., Použití MSA před TCTs/Dnázy je vysoce doporučeno vzhledem k clumping faktor negativní a trubice koaguláza pozitivní stafylokoky, které jsou stále byly získány z lidských infekcí. Tyto izoláty také produkují tepelně stabilní Dnázu a mohou být nesprávně identifikovány jako Staphylococcus aureus. Tyto kmeny však mohou být odlišeny od Staphylococcus aureus tím, že neprodukují kyselinu z maltózy, laktózy a mannitolu. Kromě toho, vzácné kmeny Staphylococcus aureus mohou být koaguláza negativní , přesto zvířecích izolátů (S. intermidius, S. hyicus, S. delphini, a. S. schleiferi subsp., coagulans), může být trubice koaguláza pozitivní ; diferenciace z nich také vyžaduje růst na MSA.

Prediktivní hodnoty

Růst na MSA měl nejvyšší negativní prediktivní hodnota (NPV), následuje Dnázy, zatímco trubice koaguláza měl nejnižší NPV (což neodpovídá vysoké citlivosti zpočátku pozorován, viz tabulka 3). Naopak, testovací kombinace dal absolutní NPV (100%) s výjimkou DNase/MSA (NPV 92%), tabulka 3., Vysoké NPV testovacích kombinací, zejména těch, které zahrnují TCT, ukazují, že testovací kombinace lze spolehlivě použít při rutinní identifikaci Staphylococcus aureus. DNase měla nejvyšší pozitivní prediktivní hodnotu (PPV), následovanou MSA (96% a 83%). Naopak samotná koaguláza trubice vedla k průměrným PPV (54% a 50%), viz tabulka 3. Zajímavé je, že test kombinace vyústila ve vysoké PPVs, s těmi, zahrnující Dnázy s nejvyšší PPVs (95%), viz tabulka 3., Tak, jako pro Nsaid, specifičnost TCT může být zlepšena tím, že souběžné identifikace izolátů s Dnázy a MSA.

ideální identifikace klinických izolátů Staphylococcus aureus proto vyžaduje řadu testů. Infekce Staphylococcus aureus jsou častější než infekce jinými bakteriemi, zejména v prostředí s vysokou prevalencí HIV/AIDS . To zaručuje správnou identifikaci izolátů pro dosažení lepších výsledků léčby., Vzhledem k tomu, že jsou prezentovány možnosti pro zlepšení citlivosti a specificity, tyto údaje se zlepší při identifikaci stafylokokového aureus v klinických vzorcích.

Doporučení

Pro rutinní identifikaci bakterie Staphylococcus aureus z klinických vzorků, doporučujeme současné použití všech tří testů (začíná růst na MSA, Dnázy a Trubice koaguláza) v nastavení, kde králíka nebo koně plazmatu nejsou snadno dostupné., Screening plazmatu od jiných druhů zvířat (např. králík, koza, prase, skot), který může být levnější a bezpečnější, a údajně účinnější, než lidské plazmy s TCTs, je doporučeno. Kromě toho, genotypizace klinických stafylokokových izolátů je doporučeno, aby speciate Nevýhody izolátů, a určit prevalenci vzácných Staphylococcus aureus a zvířecích izolátů v lidských vzorcích v Ugandě.